OPTIMIZACIÓN DE UN PROTOCOLO DEL AISLAMIENTO DEL ADN Y DE UN SISTEMA DE AMPLIFICACIÓN ISSR-PCR PARA Ceratozamia mexicana Brongn. (Zamiaceae)

Autor: Lázaro Rafael Sánchez-Velásquez, Pablo Octavio-Aguilar, Lourdes Georgina Iglesias-Andreu, Mauricio Luna-Rodríguez, Nancy Santana-Buzzy, Mario Vázquez-Torres, Nadia Guadalupe Sánchez-Coello
Jazyk: angličtina
Rok vydání: 2012
Předmět:
Zdroj: Revista Chapingo: Serie Ciencias Forestales y del Ambiente, Vol 18, Iss 1, Pp 123-133 (2012)
Universidad Veracruzana
UV
Redalyc-UV. Red de Revistas Científicas de América Latina y el Caribe, España y Portugal.
ISSN: 2007-4018
2007-3828
Popis: La mayoría de las cícadas contienen altas concentraciones de aceites esenciales, flavonoides, polifenoles y polisacáridos que interfieren en la extracción de ADN, causando productos de amplificación errados o inhibiendo la PCR. La optimización del aislamiento del ADN y el empleo de iniciadores de secuencias intergénicas repetidas simples (ISSRs) se investigaron en Ceratozamia mexicana Brongn., una cícada mexicana en peligro de extinción. El ADN obtenido de tejido foliar fresco, con un amortiguador modificado de cetil trimetil amonio, nos permitió obtener un ADN de buena calidad, sin pigmentos coloridos o contaminantes. La modificación al protocolo de extracción de ADN, basado en CTAB, fue un prelavado por 1 h, del tejido foliar, con una solución de 0.7 M de NaCl, para facilitar la lisis celular. El ADN extraído exitosamente se amplificó por PCR, usando seis iniciadores arbitrarios ISSR. Se observaron productos de amplificación reproducibles en todas las reacciones de PCR. Nuestros resultados muestran que la implementación mejora significativamente la calidad del ADN obtenido, usando una concentración baja de iniciadores (25 pM). Se detectaron 23 bandas fuertes, nueve de las cuales fueron polimórficas. Los resultados indican que el protocolo de optimización del aislamiento del ADN y en el sistema de PCR es viable para futuros trabajos en esta especie. Este trabajo es el primer protocolo de extracción de ADN y de ISSR reportado para esta especie ornamental en peligro de extinción.
Databáze: OpenAIRE
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