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Beim Tissue Engineering mit prim��ren humanen Chondrozyten ist die Dedifferenzierung w��hrend Zellproliferationsphase in vitro ein limitierender Prozess um eine ausreichende Zellzahl zu generieren f��r die Besiedelung eines klinisch relevanten Produkts. Obwohl Chondrozyten partiell redifferenzieren sobald sie in eine dreidimensionale (3D) Kultur ��berf��hrt werden, entspricht eine neu gebildete Knorpelmatrix nicht der Qualit��t eines Nativknorpels. Es wurde der Einfluss von Hypothermie Bedingungen auf die Dedifferenzierung von humanen Septumchondrozyten untersucht in einer Monolayer Zellkultur zur Proliferation, sowie in einer 3D Pelletkultur. Jede Zellkultur wurde w��hrend Zellproliferation entweder bei 32,2 ��C oder bei 37 ��C kultiviert. Weiter wurden Zellen, die bei diesen Temperaturen proliferiert wurden, in einer Pelletkultur bei 32,2 ��C und bei 37�� C untersucht. Hinwei��gebend auf den zellul��ren Differenzierungsgrad war die Bestimmung der mRNA knorpelspezifischer Zielgene mittels Polymerase Kettenreacktion (PCR) und hieraus gebildete Quotienten (Kollagen II/Kollagen I; Aggrecan/Versican). Ein jeweils h��herer Quotient zeigte einen h��heren Differenzierungsgrad an. Histologische und Immunhistochemische F��rbungen dienten zur Objektivierung vorhandener Proteine in Pelletkultur. In Monolayer wurde die Zellproliferation mittels 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium (MTS) kolorimetrisch bestimmt. In Monolayer zeigte sich unter dem Einfluss von 32,2 ��C eine signifikant langsamere Zellproliferation verglichen zur Kultur bei 37 ��C, ein Dedifferenzierungsprozess verlief bei 32,2 ��C ebenso langsamer. In Pelletkultur konnte ein Redifferenzierungsprozess bei beiden Temperaturen nachgewiesen werden, dieser zeigte sich in den Kulturen bei 37 ��C ausgepr��gter. M��gliche Vorteile durch langsamere Dedifferenzierung in Monolayer unter 32, 2 ��C werden durch effektivere Redifferenzierungsprozesse bei 37 ��C aufgehoben. Es konnte gezeigt werden dass eine gezielte Verlangsamung der Zellproliferation und Dedifferenzierung bei 32,2 ��C in Monolayer zur Zellproliferation keinen Nachteil hat wenn diese Zellen anschlie��end in eine Pelletkultur bei 37 ��C ��berf��hrt werden. |
