Extração de DNA a partir de sangue humano coagulado para aplicação nas técnicas de genotipagem de antígenos leucocitários humanos e de receptores semelhantes à imunoglobulina
| Autor: | Daniela Maira Cardozo, Gláucia Andréia Soares Guelsin, Jeane Eliete Laguila Visentainer, Samaia Laface Clementino, Cleonice de Souza, Marco Antônio Braga, Fabiano Cavalcante de Melo, Ricardo Alberto Moliterno |
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| Jazyk: | portugalština |
| Rok vydání: | 2009 |
| Předmět: |
Microbiology (medical)
Extração de DNA Padronização Oligonucleotide Molecular biology Human leukocyte antigen Biology DNA extraction Standardization law.invention chemistry.chemical_compound Infectious Diseases chemistry law Parasitology Primer (molecular biology) Coagulated blood Genotyping Techniques Genotyping Sangue coagulado DNA Polymerase chain reaction Biologia molecular |
| Zdroj: | Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical, Volume: 42, Issue: 6, Pages: 651-656, Published: DEC 2009 Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical v.42 n.6 2009 Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical Sociedade Brasileira de Medicina Tropical (SBMT) instacron:SBMT |
| Popis: | O objetivo deste estudo foi padronizar uma metodologia de extração de DNA de alta qualidade a partir de amostras de sangue coagulado. Quarenta e oito amostras de sangue humano coagulado foram utilizadas para a extração de DNA pelo kit comercial EZ-DNA® (Biological Industries, Beit Haemek, Israel), pelo kit de coluna Neoscience® (One Lambda Inc., San Diego, CA) e pelo método modificado de salting out. Apenas o método de salting out foi capaz de extrair altas concentrações de DNA (média, 180ng/µL), as quais foram medidas pelo detector de fluorescência Qubit® (Invitrogen, USA). Este método permitiu a amplificação dos genes HLA (human leukocyte antigens) pela tecnologia PCR-SSO (polymerase chain reaction - specific sequence of oligonucleotides) Luminex, a qual exige DNA de boa qualidade, e de genes KIR (killer cell immunoglobulin-like receptors) pela técnica made in house PCR-SSP (polymerase chain reaction-sequence specific of primers), a qual demanda uma concentração específica de DNA (10ng/µL). Concluímos que a técnica de salting out modificada foi muito eficiente, simples e rápida para a extração de DNA de amostras de sangue humano coagulado, com o objetivo de realizar a genotipagem de genes HLA e KIR. The objective of this study was to standardize a method for extracting high-quality DNA from samples of coagulated blood. Forty-eight samples of human coagulated blood were used for DNA extraction by means of the EZ-DNA® commercial kit (Biological Industries, Beit Haemek, Israel), the Neoscience® column kit (One Lambda Inc., San Diego, CA, USA) and a modified salting-out method. Only the salting-out method was able to extract high concentrations of DNA (mean, 180 ng/¼l), which were measured using the Qubit® fluorescence detector (Invitrogen, USA). This method enabled amplification of HLA (human leukocyte antigen) genes using the Luminex PCR-SSO (polymerase chain reaction - sequence-specific oligonucleotide) technology, which demands good quality DNA, and amplification of KIR (killer-cell immunoglobulin-like receptor) genes using an in-house PCR-SSP (polymerase chain reaction - sequence-specific primer) technique, which demands a specific concentration of DNA (10 ng/¼l). We concluded that the modified salting-out technique was very efficient, simple and fast for DNA extraction from human coagulated blood samples, with the aim of genotyping the HLA and KIR genes. |
| Databáze: | OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
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