Purificação e caracterização de BJcuL, uma lectina do veneno da serpente Bothrops Jararacussu

Autor: Daniela Diogenes de Carvalho
Přispěvatelé: Novello, Jose Camillo, 1955-2022, Antunes, Edson, Carvalho, Hernandes Faustino de, Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologia, Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas, UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 1979
Předmět:
Zdroj: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron:UNICAMP
Popis: Orientador: Jose Camillo Novello Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: As lectinas constituem um grupo de proteínas que possuem a capacidade de se ligarem especificamente e reversivelmente a determinados carboidratos. Identificadas em vegetais e animais, são também encontradas em venenos ofídicos. Quando isoladas de venenos de serpentes, essas proteínas ligam-se a 'beta¿-galactosídeos e induzem aglutinação de eritrócitos, agregação de plaquetas e são mitogênicas para linfócitos. Uma lectina específica para 'beta¿galactosídeos foi purificada do veneno de Bothrops jararacussu através de cromatografia de afinidade em D-galactose, e foi denominada BjcuL. A análise do perfil de massa molecular em SDS-PAGE a 15% mostrou que BjcuL é um homodímero composto de subunidades de 15kDa. Quando submetido à coloração para carboidratos após SDS-PAGE, a proteína mostrou reação negativa, sugerindo que BjcuL não é uma glicoproteína. BjcuL aglutina eritrócitos tripsinizados de porco e boi, em concentrações mínimas de 0,5 'mu¿g/ml e 2,0 'mu¿g/ml, respectivamente. A hemaglutinaçao de eritrócitos porcinos induzida por 4,0 'mu¿g/ml de BjcuL é inibida especificamente por lactose 0,8 mM, galactose 3,2 mM e rafinose 3,2 mM. EDTA 0,2 mM e EGTA 0,1 mM também inibem a atividade hemaglutinante de BjcuL, o que revela a dependência de cátions divalentes. A associação das subunidades da lectina de B. jararacussu é essencial para sua atividade hemaglutinante, pois BjcuL reduzida com DTT não exibem esta atividade sobre eritrócitos porcinos... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: Lectins are polyvalent carbohydrate-binding proteins which agglutinate red blood cells. Identified in plants and animals, have also been found in snake venoms. These proteins bind to lactose moieties and induce agglutination of erythocytes, aggregation of platelets and are mitogenic to lymphocytes. A galactose-specific lectin in Bothrops jararacussu venom (BJcuL) was adsorbed on a immobilized D-galactose column and eluted with 0.1 M lactose. On SDS-PAGE, under reducing conditions (0.1 M DTT), the fraction eluted showed a single band of 15 kDa, and under non reducing conditions, a major band of 30 kDa. This protein appeared not to be a glycoprotein because it gave negative reaction to the Schiff¿s reagent following treatment with periodate. Trypsined erythrocytes from pig and cow were agglutinated by BJcuL, with end points of approximately 0.5 'mu¿g/ml and 2.0 'mu¿g/ml, respectively. The hemagglutination of trypsined pig erythrocytes induced by 4.0 'mu¿g/ml of BJcuL was inhibited specifically in the presence of 0.8 mM lactose, 3.2 mM galactose, 3.2 mM raffinose. BJcuL demonstrated a requirement for divalent cation, since 0.2 mM EDTA or 0.1 mM EGTA, completely inactivated the lectin induced hemagglutination activity. The association of subunits via interchain disulfide bonds is essencial for lectin activity, since DTT-reduced BJcuL showed no hemagglutination activity against pig erythrocytes... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations Mestrado Bioquímica Mestre em Ciências Biológicas
Databáze: OpenAIRE
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