Efeito combinado da aplicação de células tronco e microcorrente na cicatrização do tendão calcanear de ratos após transecção parcial

Autor: Bortolazzo, Fernanda Oriani, 1991
Přispěvatelé: Pimentel, Edson Rosa, 1949, Aro, Andrea Aparecida de, 1980, Guerra, Flavia Da Ré, Mendonça, Fernanda Aparecida Sampaio, Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologia, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Estrutural, UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
Rok vydání: 2021
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Zdroj: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron:UNICAMP
DOI: 10.47749/t/unicamp.2018.1148935
Popis: Orientadores: Edson Rosa Pimentel, Andrea Aparecida de Aro Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O tendão calcâneo é o maior e mais resistente dentre os tendões do corpo humano. Entretanto, devido à sobrecarga, é um dos mais acometidos por lesão entre atletas, e é relativamente comum na população adulta de modo geral. A cicatrização envolve eventos que são controlados por mediadores bioquímicos que regulam o reparo. A utilização das células tronco derivadas de tecido adiposo (CTMA) apresenta diversas vantagens devido à sua capacidade de diferenciação, coleta pouco invasiva e alto rendimento celular. Efeitos promissores no reparo tendíneo tem sido também demostrando pela utilização da microcorrente (MC), pois mimetiza e amplia os sinais bioelétricos do corpo, aumentando sua habilidade em transportar nutrientes e resíduos metabólicos das células na área afetada. A associação das CTMA com MC pode representar uma alternativa para tratamento de lesões tendíneas com possíveis efeitos terapêuticos satisfatórios. Objetivo: Investigar o efeito combinado da aplicação das CTMA e MC no 14° dia do processo de cicatrização do tendão calcâneo de ratos. Materiais e Métodos: 75 ratos Wistars machos foram distribuídos em 5 grupos: normal (N); transeccionado (T); transeccionado tratado com CTMA (CT); transeccionado tratado com microcorrente (MC) e transeccionado tratado com CTMA e microcorrente (CT+MC). Análises: citometria de fluxo, fluorescência, dosagem de hidroxiprolina, Elisa, Western blotting, zimografia, medidas de birrefringência e coloração com HE e AT. Resultados: A citometria demonstrou alta expressão dos marcadores CD90 e CD105 e baixa do CD34 nas CTMA. Maior concentração de hidroxiprolina foi encontrada em tendões do grupo T em relação aos grupos CT, MC e CT+MC. Os resultados da quantificação de PCNA, assim como do TNF-alfa mostraram aumento expressivo em seus níveis nos grupos CT e CT+MC. No resultado de caspase III não houve diferença entre os grupos. A quantificação da citocina IL-10 apresentou níveis aumentados nos grupos MC e CT+MC em relação ao grupo N, assim como aumento no grupo MC em relação ao T. O colágeno I mostrou-se aumentado nos grupos MC e CT+MC, enquanto que o aumento do colágeno III na região tendínea foi mais intenso no grupo CT quando comparados ao grupo N. A isoforma ativa da MMP-2 aumentou em todos os grupos com tendões transeccionados. A microscopia de polarização mostrou maior organização das fibras de colágeno no grupo MC, devido ao maior valor de birrefringência observado nesse grupo. Na microscopia de fluorescência, observou-se no 14º dia a presença das CTMA-GFP injetadas logo após a lesão nos grupos CT e CT+MC. Nos cortes de tendões transeccionados corados com HE e AT, foram observados maior celularidade e matriz mais fortemente, respectivamente, em relação ao grupo N. Conclusão: o presente estudo indica um efeito benéfico da microcorrente na região transeccionada do tendão para a reorganização do tecido, evidenciada pelo aumento dos níveis de colágeno I e organização das fibras colágenas Abstract: The calcaneus tendon is the largest and most resistant tendon of the human body. However, due to overload, it is one of the most affected by injury among athletes, and also relatively common in the adult population in general. Healing involves events that are controlled by biochemical mediators that regulate repair. The use of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (ADMSC) has several advantages due to its capacity of differentiation, little invasive collection and high cellular yield. Promising effects on tendon repair have also been demonstrated by the use of microcurrent (MC) as it mimics and amplifies the bioelectrical signals of the body, increasing its ability to carry nutrients and metabolic waste from the cells in the affected area. The association of ADMSC with MC may represent an alternative for treatment of tendinous lesions with possible satisfactory therapeutic effects. Objective: To investigate the combined effect of ADMSC and MC on the calcaneus tendon healing process in rats. Materials and Methods: 75 male Wistars rats were distributed in 5 groups: normal (N); transected tendon (T); transected tendon treated with ADMSC (SC); transected tendon treated with microcurrent (MC) and transected tendon treated with ADMSC and microcurrent (SCMC). Samples of each group were analyzed using flow cytometry, hydroxyproline dosage, Elisa, Western blotting and zymography. For morphology birefringence measurements and sections stained with HE and TB, were analyzed. Results: Cytometry demonstrated high expression of the CD90 and CD105 markers and low CD34 markers. Higher concentration of hydroxyproline was found in tendons of the T group in relation to the SC, MC and SCMC groups. The results of the quantification of PCNA as well as of TNF-alpha showed an expressive increase in their levels in the SC and SCMC groups. The quantification of IL-10 cytokine showed increased levels in the MC and CT + MC groups in relation to the N group, as well as in the MC group in relation to the T. Collagen I was shown to be increased in the groups submitted to MC and ADMSC+ MC, whereas the increase in collagen III in the transection region of the tendon was more intense in the SC group when compared to the Normal tendon. The active isoform of MMP-2 was increased in all groups with transected tendons. Analysis under Polarization microscopy showed greater organization of the collagen fibers in the MC group, due to the higher birefringence value observed in that group. In the fluorescence microscopy, the presence of the ADMSC-GFP injected shortly after the injury in the CT and CT + MC groups was observed on the 14th day. In the sections of transected tendons stained with HE and TB, greater cellularity and more strongly stained extracellular matrix were observed in all transected tendons, in relation to the N group. Conclusion: the present study indicates a beneficial effect of the microcurrent in the transected region of the tendon for the reorganization of the tissue, evidenced by the increase of collagen I levels and the organization of the collagen fibers Mestrado Biologia Celular Mestra em Biologia Celular e Estrutural CAPES
Databáze: OpenAIRE
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