Reação de hemi-nested RT-PCR dirigida ao gene da hemaglutinina-esterase do Coronavírus Bovino
| Autor: | Paulo Eduardo Brandão, Karen Miyuki Asano, Sheila de Oliveira Souza Silva, Sibele Pinheiro de Souza, Leonardo José Richtzenhain, Laura Yaneth Villarreal Buitrago |
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| Jazyk: | angličtina |
| Rok vydání: | 2010 |
| Předmět: |
Coronavírus bovino
Diversidade genética General Veterinary Hemagglutinin esterase biology Hemaglutinina-esterase RT-PCR RNA virus Amplicon medicine.disease_cause biology.organism_classification Molecular biology Titer Real-time polymerase chain reaction medicine lcsh:Animal culture Gene Bovine coronavirus Coronavirus lcsh:SF1-1100 |
| Zdroj: | Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science, Vol 47, Iss 4 (2010) |
| ISSN: | 1678-4456 1413-9596 |
| Popis: | O coronavírus bovino (BCoV) é um vírus RNA simples fita, de sentido positivo, não segmentado com envelope constituído de uma camada dupla de lipídios com quatro proteínas (HE, S, E e M) que resultam no aspecto de coroa dos vírions. Como a HE (hemaglutinina-esterase) é uma proteína polimórfica com uma função de receptor aglutinante secundária, estudos sobre a diversidade do gene HE podem possibilitar maiores informações sobre a evolução e interação hospedeiro-parasita do BCoV. Uma reação de hemi-nested RT-PCR foi desenvolvida para a amplificação de um produto de 441pb do gene HE do BCoV (nt 543 ao 562). Temperaturas ótimas de hibridização foram testadas em um termociclador com gradiente para a reação de hemi-nested e utilizada no protocolo final. A sensibilidade analítica foi determinada por meio da diluição serial na base 10 do BCoV amostra Kakegawa (título HA: 256) em uma suspensão fecal negativa para BCoV, resultando positiva até a diluição de 10-6, mostrando uma alta sensibilidade analítica sem inibição na PCR. O protocolo final da hemi-nested RT-PCR foi aplicado a 21 amostras fecais de vacas previamente positivas para BCoV e o sequenciamento de DNA do produto de 441pb de 14 amostras resultaram em sequências com elevado escore do gene HE do BCoV após a análise no BLAST/n. Essa hemi-nested RT-PCR é uma ferramenta poderosa para estudos de diversidade filogenética de linhagens de campo de BCoV e para estudos comparativos entre os diferentes genes dos Coronavírus. |
| Databáze: | OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
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