Avaliacao de quatro metodos diferentes de extracao de DNA em isolados clinicos de estafilococos coagulase negativos (SCoN)

Autor: Pedro Alves d'Azevedo, Caio Fernando de Oliveira, Thiago Galvão da Silva Paim, Keli Cristine Reiter, Alexandre Rieger
Jazyk: angličtina
Rok vydání: 2014
Předmět:
Zdroj: Revista do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo; Vol. 56 No. 1 (2014); 29-33
Revista do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo; Vol. 56 Núm. 1 (2014); 29-33
Revista do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo; v. 56 n. 1 (2014); 29-33
Revista do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo
Instituto de Medicina Tropical (IMT)
instacron:IMT
Revista do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo, Vol 56, Iss 1, Pp 29-33 (2014)
Revista do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo, Volume: 56, Issue: 1, Pages: 29-33, Published: JAN 2014
ISSN: 1678-9946
0036-4665
Popis: Currently there are several methods to extract bacterial DNA based on different principles. However, the amount and the quality of the DNA obtained by each one of those methods is highly variable and microorganism dependent, as illustrated by coagulase-negative staphylococci (CoNS) which have a thick cell wall that is difficult to lyse. This study was designed to compare the quality and the amount of CoNS DNA, extracted by four different techniques: two in-house protocols and two commercial kits. DNA amount and quality determination was performed through spectrophotometry. The extracted DNA was also analyzed using agarose gel electrophoresis and by PCR. 267 isolates of CoNS were used in this study. The column method and thermal lyses showed better results with regard to DNA quality (mean ratio of A260/280 = 1.95) and average concentration of DNA (), respectively. All four methods tested provided appropriate DNA for PCR amplification, but with different yields. DNA quality is important since it allows the application of a large number of molecular biology techniques, and also it's storage for a longer period of time. In this sense the extraction method based on an extraction column presented the best results for CoNS. Atualmente, para extrair o DNA bacteriano, existem diversos métodos baseados em diferentes princípios. Entretanto, a quantidade e qualidade do DNA obtido por cada um destes métodos é variável e depende do tipo de micro-organismo em questão; os estafilococos coagulase-negativos (CoNS), por exemplo, possuem parede celular espessa difícil de lisar. O objetivo deste estudo foi comparar a quantidade e a qualidade do DNA extraído de isolados clínicos de CoNS utilizando quatro metodologias diferentes: dois protocolos caseiros e dois kits comerciais. A determinação da quantidade e da qualidade do DNA foi realizada por espectrofotometria. O DNA extraído também foi analisado em eletroforese em gel de agarose e por PCR. A concentração média de DNA foi mais alta no método de lise térmica (). Entretanto, com relação à qualidade do DNA, o kit comercial que utiliza um método de extração baseado em uma coluna de separação apresentou melhor resultado (média da relação A260/280 = 1,95). As quatro técnicas testadas forneceram DNA passível de amplificação por PCR, porém com diferentes rendimentos. A qualidade do DNA extraído de bactérias é importante, pois possibilita a realização de maior número de técnicas de biologia molecular e também armazenamento do material por maior período de tempo. Neste sentido, a técnica de extração por coluna de separação apresentou melhor desempenho frente aos CoNS.
Databáze: OpenAIRE
Externí odkaz: