Produção de anticorpos policlonais anti-Cryptosporidium e padronização da imunofluorescência direta para a detecção de oocistos na água
| Autor: | Adriana Oliveira Costa, Silvia Cristina Osaki, Juliana Tracz Pereira, Nelson Luis Mello Fernandes, Márcia Benedita de Oliveira Silva, Vanete Thomaz Soccol, Ludmilla Della Coletta Troiano, Ernesto Renato Krüger |
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| Jazyk: | angličtina |
| Rok vydání: | 2011 |
| Předmět: |
Microbiology (medical)
lcsh:Arctic medicine. Tropical medicine lcsh:RC955-962 animal diseases Antibodies Protozoan Cryptosporidium Fresh Water Biology Sensitivity and Specificity Immunoglobulin G Microbiology chemistry.chemical_compound Antigen parasitic diseases Animals Polyclonal antibodies Imunofluorescência direta Oocistos Fluorescein isothiocyanate Direct fluorescent antibody Oocysts Water biology.organism_classification Água Infectious Diseases chemistry Giardia duodenalis Fluorescent Antibody Technique Direct Direct immunofluorescence biology.protein Parasitology Rabbits Antibody Anticorpos policlonais |
| Zdroj: | Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical, Vol 44, Iss 5, Pp 587-590 (2011) Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical v.44 n.5 2011 Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical Sociedade Brasileira de Medicina Tropical (SBMT) instacron:SBMT Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical, Volume: 44, Issue: 5, Pages: 587-590, Published: OCT 2011 |
| ISSN: | 1678-9849 |
| Popis: | INTRODUCTION: The production of anti-Cryptosporidium polyclonal antibodies and its use in direct immunofluorescence assays to determine the presence of Cryptosporidium in water are described in the present work. METHODS: Two rabbits were immunized with soluble and particulate antigens from purified Cryptosporidium oocysts. The sera produced were prepared for immunoglobulin G extraction, which were then purified and conjugated with fluorescein isothiocyanate (FITC). Slides containing known amounts of oocysts were prepared to determine the sensitivity of the technique. To test the specificity, slides containing Giardia duodenalis cysts were prepared. RESULTS: The conjugate was successfully used in water samples experimentally contaminated with Cryptosporidium oocysts, and it was possible to detect up to five oocysts/spot, corresponding to contamination of 250 oocysts/mL. CONCLUSIONS: The three immunizations performed in the rabbits were enough to produce antibodies against Cryptosporidium, the standard direct immunofluorescence assay permitted the detection of five oocysts in 20% of the samples, and no cross-reaction with Giardia duodenalis cysts occurred. INTRODUÇÃO: A produção de anticorpos policlonais anti-Cryptosporidium e sua utilização na imunofluorescência para determinar a presença de Cryptosporidium em água são descritas no presente trabalho. MÉTODOS: Dois coelhos foram imunizados com antígeno solúvel e particulado provenientes de oocistos purificados de Cryptosporidium. O soro produzido foi preparado para a extração de imunoglobulinas G, que foram purificadas e conjugadas com isotiocianato de fluoresceína (FITC). Lâminas contendo quantidades conhecidas de oocistos foram preparadas para determinar a sensibilidade da técnica. Para testar a especificidade foram preparadas lâminas contendo cistos de Giardia duodenalis. RESULTADOS: O conjugado foi usado com sucesso em amostras de água contaminadas experimentalmente com oocistos de Cryptosporidium, sendo capaz de detectar até cinco oocistos/spots que corresponde a uma contaminação de 250 oocistos/mL. CONCLUSÕES: As três imunizações realizadas nos coelhos foram suficientes para produção de anticorpos contra Cryptosporidium; a reação de imunofluorescência direta padronizada permitiu a detecção de cinco oocistos em 20% das amostras; não houve reação cruzada com cistos de Giardia duodenalis. |
| Databáze: | OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
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