Print-capture PCR for detection of tomato begomoviruses from plants and whiteflies
| Autor: | Tatsuya Nagata, Leonardo de B. Giordano, Antonio C. de Ávila, A. K. Inoue-Nagata |
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| Jazyk: | angličtina |
| Rok vydání: | 2004 |
| Předmět: |
biology
Filter paper business.industry Bemisia argentifoli Begomovirus food and beverages Plant Science Whitefly biology.organism_classification Molecular biology Bemisia tabaci Lycopersicon law.invention Biotechnology chemistry.chemical_compound chemistry law Plant virus Geminivírus Geminiviridae business DNA Polymerase chain reaction |
| Zdroj: | Fitopatologia Brasileira v.29 n.1 2004 Fitopatologia Brasileira Sociedade Brasileira de Fitopatologia (SBF) instacron:SBF Fitopatologia Brasileira, Volume: 29, Issue: 1, Pages: 91-93, Published: FEB 2004 |
| Popis: | Print-capture (PC) Polymerase chain reaction (PCR) was evaluated as a novel detection method of plant viruses. Tomato (Lycopersicon esculentum) plants infected with begomovirus (fam. Geminiviridae, gen. Begomovirus) and viruliferous whiteflies were used to study the efficiency of the method. Print-capturing steps were carried out using non-charged nylon membrane or filter paper as the solid support for DNA printings. Amplified DNA fragments of expected size were consistently obtained by PCR from infected plants grown in a greenhouse, after direct application of printed materials to the PCR mix. However, virus detection from a single whitefly and from field-grown tomato samples required a high temperature treatment of printed material prior to PCR amplification. Comparison of nylon membrane and filter paper as the solid support revealed the higher efficiency of the nylon membrane. The application of print-capture PCR reduces the chances of false-positive amplification by reducing manipulation steps during preparation of the target DNA. This method maintains all the advantages of PCR diagnosis, such as the high sensitivity and no requirement of radioactive reagents. O "print-capture (PC) Polymerase chain reaction (PCR) " foi avaliado como um método inovativo de detecção de vírus de plantas. Plantas de tomate (Lycopersicon esculentum) infetadas com begomovírus e moscas-brancas virulíferas foram usadas para estudar a eficiência do método. Os passos de captura do DNA foram realizados usando filtros de náilon não carregados ou papel-filtro como suporte sólido. Fragmentos de DNA amplificados de tamanho esperado foram consistentemente obtidos por PCR de plantas infetadas cultivadas em casa de vegetação, após aplicação direta dos materiais fixados na mistura para PCR. Entretanto, para a detecção de vírus feita de uma mosca-branca e de amostras de tomateiros cultivados no campo foi necessário um tratamento a alta temperatura do material fixado antes da amplificação por PCR. Na comparação entre o filtro de náilon e papel-filtro como suporte sólido, o filtro de náilon apresentou maior eficiência de detecção. A aplicação do PC PCR reduz as chances de ocorrência de resultados falsos-positivos pela diminuição de passos de manipulação durante a preparação do DNA-alvo. Este método mantém todas as vantagens da diagnose por PCR, como a alta sensibilidade sem a necessidade de uso de reagentes radioativos. |
| Databáze: | OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
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