Untersuchungen zur Rolle von L1CAM im Retinoblastom: Expression, Funktion, Prozessierung und Signalwege

Autor: Dr��ger, Oliver
Přispěvatelé: Dünker, Nicole, Dünker, Nicole (Akademische Betreuung)
Jazyk: němčina
Rok vydání: 2021
Předmět:
DOI: 10.17185/duepublico/74917
Popis: Das neuronale Zelladh��sionsmolek��l L1CAM liegt in einer Vielzahl von Krebserkrankungen st��rker exprimiert vor als in gesundem Gewebe und ist daher ein vileversprechendes Ziel f��r neue Therapieans��tze. Eine ��berexpression von L1CAM geht im Allgemeinen mit fortgeschrittener Tumorerkrankung und schlechter Prognose f��r den Verlauf der Erkrankung einher. Die vorliegende Dissertationsschrift beschreibt die Rolle von L1CAM im Retinoblastom (RB), der am h��ufigsten auftretenden, malignen Augenerkrankung des fr��hen Kindesalters. Es wurden in RB Zelllinien, Patientenproben sowie chemosensitiven und resistenten RB Zellen unterschiedliche Expressionsmuster von L1CAM nachgewiesen. Der Lentivirus-vermittelte L1CAM Knockdownf��hrte zu einer signifikanten Erh��hung der Apoptose sowie einer Reduktion der Zellviabilit��t, der Proliferation, dem Zellwachstum und der Koloniebildungskapazit��t, wohingegen L1CAM-��berexprimierende RB Zellen gegenteilige Effekte aufzeigten. Es wurde eine signifikant verringerte Tumorbildungs- und migrationskapazit��t im Chorioallantoismembran (CAM) Assay nach dem Knockdown von L1CAM nachgewiesen. Eine stabile L1CAM ��berexpression verst��rkte die Tumorbildung, hatte aber keine Auswirkung auf das Migrationspotential in vivo. Zudem konnte gezeigt werden, dass ein L1CAM Knockdown die Zellviabilit��t von Etoposid-resistenten RB Zellen in vitro sowie das Tumorbildungspotential in vivo verringert. Die untersuchten L1CAM Sheddasen ADAM10 und ADAM17 sind beide gleicherma��en differentiell in RB Zelllinien exprimiert und es konnte eine ADAM-abh��ngige Prozessierung von L1CAM detektiert werden. Die l��sliche L1CAM Ektodom��ne konnte im Kultur��berstand von RB355, WERI-Rb1 und Y79 Zellen nachgewiesen werden, was dessen Rolle bei der Tumorzellproliferation und der Signaltransduktion unterstreicht. Ebenso konnten die Proteine Ezrin, Galectin-3 und FGFb als Zielgene von L1CAM in RB Zellen identifiziert werden. Des Weiteren konnte eine erh��hte Vimentin Expression in L1-��berexprimierenden RB247 Zellen nachgewiesen werden, was auf die Rolle von L1CAM w��hrend der EMT hindeuten k��nnte. Die ��berexpression von miR-146a-5p f��hrte in einer von drei untersuchten RB Zelllinien zu einer signifikanten Reduktion der L1CAM Proteinexpression. Eine Bindung der miR-346 an eine in silico prognostizierten Bindestelle in der 3���-UTR von L1CAM konnte jedoch nicht nachgewiesen werden. Zusammenfassend stellen L1CAM, dessen Zielgene Ezrin, Galectin-3 und FGFb sowie die Shedassen ADAM10 und ADAM17 m��gliche Ziele f��r neue RB Therapien dar.
The neuronal cell adhesion molecule L1CAM is differentially expressed in a variety of human cancers and a promising target for novel cancer therapies. Overexpression of L1CAM is associated with advanced cancer stages and a poor prognosis for the patients��� course of disease. The doctoral thesis presented focuses on the role of L1CAM in retinoblastoma (RB), the most common malignant intraocular childhood tumor. Differential expression patterns for L1CAM in RB cell lines were observed, both in parental and chemoresistant cell lines as well as in patient samples. Lentiviral L1CAM knockdown induced apoptosis and reduced cell viability, proliferation, growth and colony formation capacity of RB cells, while L1CAM overexpressing RB cells showed exact opposite effects. Decreased tumorigenic and migration potential of RB cells in vivo were revealed by chicken chorioallantoic membrane (CAM) assays. Stable overexpression of L1CAM increased the tumorigenic potential of RB247 cells in vivo but had no effect on migration capacity. Moreover, L1CAM depletion decreased the tumorigenic potential and cell viability of etoposide resistant RB cell lines upon etoposide treatment in vitroand in vivo. Both L1CAM sheddases, ADAM10 and ADAM17, were found to be likewise differentially expressed in the RB cell lines investigated. Hence, an involvement in L1CAM processing in RB cells could be verified. The soluble L1CAM ectodomain was found in cell culture supernatants of RB355, WERI-Rb1 and Y79 cells suggesting a role in tumor cell proliferation and signaling. Besides, ezrin, galectin-3 and FGFb as L1CAM downstream signaling target genes in RB cells. Furthermore, vimentin expression is increased upon L1-overexpression, indicating the role of L1CAM in EMT-associated cellular processes in RB. Overexpression of miR-146a-5p significantly downregulate L1CAM levels in WERI-Rb1 but not in RB355 and Y79 RB cell lines. Binding studies of miR-346 at the in silico proposed binding site in the 3���-UTR of L1CAM could not be verified by luciferase assays. Summing up, one can state that L1CAM, it���s signaling targets ezrin, gal-3, FGFb and its processing sheddases are potential novel targets for future therapeutic RB approaches.
Databáze: OpenAIRE