Avaliação da atividade anti-Candida de compostos purificados isolados de diferentes espécies de Mentha
| Autor: | Boni, Giovana Cláudia, 1985 |
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| Přispěvatelé: | Höfling, José Francisco, 1947, Vizoto, Natália Leal, Müller, Karina Cogo, Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Odontologia de Piracicaba, Programa de Pós-Graduação em Biologia Buco-Dental, UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS |
| Rok vydání: | 2021 |
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| Zdroj: | Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) instacron:UNICAMP |
| Popis: | Orientador: Jose Francisco Hofling Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba Resumo: Plantas medicinais tem sido alvo de estudos na descoberta de novos fármacos, por serem fontes de compostos potencialmente bioativos que atuam na manutenção da saúde humana. A descoberta de novas substâncias antimicrobianas derivadas de produtos naturais, são importantes no controle de microrganismos, principalmente, devido ao aumento de casos de resistência a antimicrobianos convencionais. Nesse sentido, leveduras do gênero Candida tem se tornado um problema a saúde pública nas últimas décadas devido ao aumento de infecções denominadas candidoses. Candida spp. possui mecanismos de virulência, como o polimorfismo e formação de biofilme, que facilitam o desenvolvimento da infecção e dificultam seu tratamento. Paralelamente, estudos encontrados na literatura com Mentha spp. e seus compostos bioativos, descrevem sua ação antifúngica. Sendo assim, o objetivo do trabalho foi avaliar a Concentração Inibitória Mínima (CIM), Concentração Fungicida Mínima (CFM) de compostos isolados, a ação dos compostos sobre fatores de virulência da levedura (biofilme e polimorfismo) e a ação citotóxica dos compostos sobre células HaCat. Os compostos isolados (carvona, mentona, mentofurano e pulegona), foram testados através da técnica de microdiluição em caldo de susceptibilidade a antifúngicos (CSLI, 2008), em cepas de Candida spp. A cepa utilizada para os testes de biofilme e polimorfismo foi a Candida albicans MYA-2876. Os biofilmes em formação e maduro foram pré- incubados por 2 e 24 horas respectivamente e posteriormente adicionados concentrações decrescentes dos compostos. Ambos foram mensurados após exposição de 2 horas de XTT A490nm. O biofilme foi analisado através de Microscópio Eletrônico de Varredura a fim de avaliar sua estrutura após o tratamento com os compostos. O polimorfismo da levedura foi avaliado quantitativamente e qualitativamente quanto a capacidade do composto de inibir a formação de hifas através da exposição ao soro fetal bovino (SFB), com cultivo da cepa em meio líquido (análise microscópica) e sólido (análise macroscópica). A ação citotóxica dos compostos foi avaliada em células HaCat, cultivadas em meio RPMI/SFB e foram quantificadas através da adição de SRB e mensuradas a A530nm. Todos os compostos inibiram o crescimento das cepas testadas, sendo a menor CIM encontrada de 0,125 mg/mL. Os compostos inibiram até 99% o biofilme em formação e desconstruiu em até 97% do biofilme maduro. Através de MEV, observou-se que o tratamento com os compostos provocou alterações do envelope celular das leveduras. As leveduras expostas aos compostos no teste de formação de hifas em meio líquido, com avaliação microscópica, mostraram diminuição de formação de hifas. Os compostos que apresentaram modificações macroscópicas na morfologia das colônias foram carvona e pulegona. A análise quantitativa de formação de tubos germinativos teve inibição de até 86%. O ensaio de citotoxicidade mostrou viabilidade celular acima de 50% após exposição aos compostos. A partir dos resultados obtidos, podemos afirmar que os compostos testados apresentam atividade antifúngica, possuem ação sobre os fatores de virulência da levedura, como formação de biofilme e polimorfismo e demonstram baixa citotoxicidade, podendo ser potenciais fontes para produção de novos produtos farmacológicos antifúngicos Abstract: Medicinal plants has been the subject of many researchs in an attempt to discovery new drugs, as a source of potentially bioactive compounds that may act in maintaining human health. The discovery of new antimicrobial substances derived from natural products, are important in the microorganisms control, mainly due to the increase in cases of resistance to conventional antibiotics. In this sense, Candida species has become a problem of public health in recent decades due to increased infections named candidiasis. Candida spp. show virulence mechanisms, such as polymorphism and biofilm formation, which facilitates the development of infections and hinder their treatment. In parallel, studies related in the literature with Mentha spp. and their bioactive compounds, describe their antifungal activity. In this sense, the objective of this study was to evaluate the minimum inhibitory concentration (MIC), Concentration Fungicide Minimum (MFC) of isolated compounds, their effects on yeast virulence factors (biofilm and polymorphism) and the cytotoxical action of compounds on HaCat cells. The isolated compounds (carvone, mentone, menthofuran and pulegone) were tested by microdilution method in broth susceptibility to antifungal agents (CSLI, 2008), in strains of Candida spp. The strain used for biofilm testing and polymorphism was Candida albicans MYA-2876. For tests on biofilm formation and mature biofilm, the cells were pre-incubated 2 and 24 respectively, and the added compounds. The biofilm was quantified by addition of XTT and reader at A490nm. The biofilm was analyzed by scanning electron microscopy to assess the structure of the biofilm after treatment with the compounds. The polymorphism were evaluated qualitatively and quantitative as the ability of the compound to inhibit the hyphae formation through exhibition in fetal bovin serum (FBS) , with cultivation of strain in liquid medium (microscopic analysis) and solid (macroscopic analysis) medium. The cytotoxical action of the compounds was evaluated in HaCaT cells, cultured in RPMI / FBS quantified by the addition of SRB and read at A530nm. All compounds inhibited the growth of the strains, the MIC was found of 0.125 mg/mL. The compounds inhibited 99% of the biofilm formation and deconstructed by up to 97% of mature biofilm. By scanning electron microscopy, it was observed that the treatment of the compounds caused cell envelope changes of yeasts. Yeasts exposed to the compounds of hyphae forming assay in liquid medium with microscopical evaluations showed decreased hyphae formation .Compounds that showed macroscopic changes in the morphology of the colonies were carvone and pulegone. The quantitative analysis of formation of germ tube inhibition was up to 86%. The cytotoxicity assay showed cell viability above 50% after exposure to compounds. From the results obtained, it can be stated that the tested compounds have a antifungal activity, acts on yeast virulence factors, such as biofilm and polymorphism, exhibit cytotoxicity low and may be potential sources for the production of new antifungal products Mestrado Microbiologia e Imunologia Mestra em Biologia Buco-Dental |
| Databáze: | OpenAIRE |
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