Aspectos funcionais da hemoglobina humana e suas variantes em bolsas de sangue

Autor: Grigoleto, Marcela Regina Paganuchi, 1993
Přispěvatelé: Jorge, Susan Elisabeth Domingues Costa, 1983, Barjas-Castro, Maria Lourdes, Corat, Marcus Alexandre Finzi, Bezerra, Marcos Andre Cavalcanti, Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências Médicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
Rok vydání: 2021
Předmět:
Zdroj: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron:UNICAMP
DOI: 10.47749/t/unicamp.2020.1127242
Popis: Orientadores: Susan Elisabeth Domingues Costa Jorge, Maria de Lourdes Rios Barjas de Castro Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A hemoglobina humana (Hb) é a proteína heme presente nos eritrócitos. Quando há diminuição dos valores de referência da Hb, atingindo valores de Hb abaixo de 7 g / dL, o,paciente pode apresentar a anemia aguda ou crônica. Portanto, a terapia transfusional de concentrado de hemácias (CH) é geralmente necessária para tratar ou prevenir a liberação iminente e inadequada de O2 nos tecidos. Desta forma, avaliamos a eficiência funcional das variantes Hb AS e Hb AC em relação à Hb nativa, Hb AA, extraídas de CH (Bolsas TAB contendo CPD/Sag-Manitol) em diferentes períodos de armazenamento: 48 horas(D2), 21 dias(D21) e 42 dias (D42); tanto quanto submetidas a diferentes processos de desleucotização e/ou inativação de linfócitos: filtração (F), e filtração+irradiação (F+I), comparadas ao CH sem processamento e irradiação com raios y (I). Foram selecionados 7 doadores (Hemocentro da Unicamp) para coleta de bolsas de sangue Top-Bottom (CPD/SAGM) (3 Hb AA, 2 Hb AS e 2 Hb AC) para obtenção do Concentrado de Hemácias (CH), sendo fracionada em quatro bolsas pediátricas filtração (D1) / filtração + irradiação (D1), comparadas aos controles (sem processamento) e irradiação com raios ? (D1). As avaliações funcionais e bioquímicas da Hb foram realizadas sob os tempos de armazenamento D2(48 horas), D21 e D42. Os estudos de função foram realizados pelo método espectrofotométricos-tonométricos com a Hb purificada por cromatografia de exclusão molecular (Sephadex 25G) e de troca iônica (Amberlite MB-3). A função da Hb AA, AS e AC foram avaliadas pela obtenção da p50 nos pHs 6,5 - 7,0 - 7,5 - 8,0 (Efeito Bohr) e pelo cálculo da Cooperatividade heme-heme (Constante de Hill - n), no estado purificado (stripped) e na presença de efetor alostérico hexafosfato de inositol (IHP, 1mM- mimético ao 2,3-BPG que reduz a afinidade da Hb pelo O2). Adicionalmente, parâmetros bioquímicos de qualidade do CH (2,3-BPG, ATP, taxa de hemólise, índices de gasometria com pH, osmolaridade, Na+,Cl-, glicose, lactato, pO2 e pCO2 também foram monitorados ao longo do tempo. Resultados apontam que, em 21 dias de armazenamento, os processos de filtração e filtração+irradiação em CH-AA e AC stripped parecem demonstrar menor afinidade da Hb pelo O2 no pH ácido (6,5) em relação as amostras sem processamento e irradiação. Já em CH- AS stripped a irradiação parece demonstrar maior afinidade da Hb pelo O2 em pH ácido (6,5) em relação as amostras sem processamento. Com a adição do efetor alostérico (IHP), os CH AA, e AS parecem diminuir a afinidade de Hb pelo O2 em pH ? 7,0, enquanto que AC irradiadas parecem demonstrar maior afinidade de Hb pelo O2 em pH alcalino (8,0). Desta forma, os cálculos da Constante de Hill (n) no intervalo de pHs de 6,5 a 8,0 apontaram ausência de cooperatividade heme-heme (em torno de 1), tanto na presença quanto ausência de IHP, o que poderia indicar que os processos de leucodepleção e/ ou irradiação com raios y podem estar associadas ao mecanismo deficitário de cooperatividade heme-heme Abstract: Human hemoglobin (Hb) is the heme protein present in erythrocytes. When there is a decrease in Hb reference values, reaching Hb values below 7 g / dL, due to acute or chronic anemia, causing a risk of tissue hypoxia and impaired vital functions. Therefore, red blood cell (RBC) transfusion therapy is generally necessary to treat or prevent imminent and inappropriate O2 release into tissues. Thus, we assessed the functional efficiency of the Hb AS and Hb AC variants in relation to native Hb, Hb AA, extracted from RBC (T&B bags containing CPD / Sag-Mannitol) in different storage periods: 48 hours (D2), 21 days (D21) and 42 days (D42); as well as subjected to different processes of leukoreduction and / or irradiation: filtration (F), and filtration + irradiation (F + I), compared to RBC without processing and irradiation with rays (I). Seven donors (Hemocentro da Unicamp) were selected to collect Top-Bottom blood bags (CPD / SAGM) (3 Hb AA, 2 Hb AS and 2 Hb AC) to obtain the RBC, fractioned into four pediatric bags filtration (D1) / filtration + irradiation (D1), compared to controls (without processing) and irradiation with ? rays (D1). Functional and biochemical evaluations of Hb were performed under storage times D2 (48 hours), D21 and D42. Function studies were performed using the spectrophotometric-tonometric method with Hb purified by molecular exclusion chromatography (Sephadex 25G) and ion exchange (Amberlite MB-3). The function of Hb AA, AS and AC were evaluated by obtaining p50 at pHs 6.5 - 7.0 - 7.5 - 8.0 (Bohr Effect) and by calculating heme-heme Cooperativity (Hill's constant - n ), in the purified state (stripped) and in the presence of allosteric effector inositol hexaphosphate (IHP, 1mM-mimetic to 2,3-BPG that decrese the affinity of Hb for O2). In addition, RBC biochemical quality parameters (2,3-BPG, ATP, hemolysis rate, blood gas with pH, osmolarity, Na+, Cl-, glucose, lactate, pO2 and pCO2 were also monitored over time. Results indicate that, in 21 days of storage, the F and F+I process in RBC-AA and AC stripped demonstrate decrease affinity in acid pH (6.5) in relation to samples without processing and irradiation. RBC-AS stripped irradiation demonstrate increase affinity of Hb for O2 at acidic pH (6.5) compared to unprocessed samples.With the addition of the allosteric effector (IHP), RBC-AA, and AS decrease Hb affinity for O2 at pH ? 7.0, while irradiated RBC show a increase affinity of Hb for O2 at alkaline pH (8.0), thus calculating Hill's Constant (n) in the pH range of 6.5 to 8,0 resulted the absence of heme-heme cooperativity (near 1), both in the presence or absence of IHP, which could indicate that the leukodepletion and / or irradiation process may be associated with the deficient mechanism of heme-heme cooperativity Mestrado Patologia Clínica Mestra em Ciências Médicas CAPES 88882.434952/2019-01 FAPESP 2014/00984-3
Databáze: OpenAIRE
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