Biochemische Charakterisierung des archäellen Argonaute-Proteins aus Methanocaldococcus jannaschii und strukturelle Untersuchungen mit Einzelmolekül-Förster-Resonanz-Energie-Transfer-Studien
| Autor: | Zander, Adrian |
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| Rok vydání: | 2018 |
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| DOI: | 10.5283/epub.36759 |
| Popis: | In dieser Arbeit werden Methoden zur Expression von des archäellen Argonaute-Proteins aus Methanocaldococcus jannaschii mit nachfolgender Reinigung beschrieben. Es werden anschließend Verfahren zur Untersuchung der Bindungsfähigkeit, Nukleaseaktivität, Einbringung unnatürlicher Aminosäuren in das Protein während der rekombinanten Expression, ortsspezifischen Markierung des Proteins mit Fluoreszenzfarbstoffen und darauf aufbauenden Einzelmolekül-Förster-Resonanz-Energie-Transfer-Studien gezeigt. Daraus folgend wird beschrieben, welche potentielle biologische Rolle dieses Protein in der Zelle einnehmen kann, basierend auf der Prozessierung langkettiger, doppelsträngiger DNA. In this thesis methods for expression and subsequent purification of the archaeal Argonaute protein from Methanocaldococcus jannaschii are described. In addition, methods for investigation of binding capability, nuclease activity, Integration of unnatural amino acids while recombinant expression of the protein, site-specific labeling of the protein using fluorescence dyes and following up single molecule Förster resonance energy transfer studies are shown. By this, a potential biological function of this protein in the cell can be speculated, based on the processing of long chain, double stranded DNA. |
| Databáze: | OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
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