| Autor: |
M.C. Vega Hernández, E. Ramos Trujillo, F. Claverie Martín, M.I. Luis Yanes, V. García Nieto |
| Rok vydání: |
2007 |
| Předmět: |
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| Zdroj: |
Anales de Pediatría, Vol 67, Iss 5, Pp e530-(2007) |
| ISSN: |
1695-4033 |
| Popis: |
La enfermedad de Dent es una tubulopatia caracterizada por proteinuria de bajo peso molecular, hipercalciuria, nefrocalcinosis y litiasis renal. Mutaciones en CLCN5, el gen que codifica la proteina ClC-5, un intercambiador de transporte Cl–/H+, causan esta enfermedad. Nosotros hemos identificado varias mutaciones nuevas en el gen CLCN5 de pacientes espanoles con enfermedad de Dent. El objetivo de este estudio es analizar el efecto de dos mutaciones exonicas y de una mutacion en un sitio de splicing en el procesamiento (splicing) del pre-mRNA (pre-RNA mensajero) de CLCN5. Tambien hemos examinado los mecanismos moleculares responsables de la perdida del exon 11 en el RNA de un paciente con una mutacion previamente descrita consistente en la insercion de un elemento Alu en este gen. Se construyeron minigenes CLCN5 en el vector de clonacion Exontrap. Las modificaciones se introdujeron por mutagenesis dirigida y fueron confirmadas por secuenciacion del ADN. Las muestras de ARN se aislaron de muestras de sangre y de celulas COS7 transfectadas y fueron analizadas por RT-PCR. El analisis del ARN mostro que la mutacion IVS2-2A > G resulta en la perdida del exon 3 en el mARN de CLCN5, mientras que la mutacion W547G altera la expresion de dos formas alternativas de splicing. Uno de estos mARN mostro la perdida de los exones 10 y 11. Ambas perdidas de exones cambian la pauta de lectura introduciendo un codon prematuro de parada. El restablecimiento de secuencias exonicas amplificadoras de splicing (ESE) del exon 11-Alu promueve su incorporacion en el mARN. Nuestros resultados indican que las mutaciones con cambio de sentido en el gen CLCN5 pueden tambien alterar el splicing. La perdida del exon 11 producida por la insercion Alu fue debida a la destruccion de un ESE, aunque no puede excluirse la posibilidad de que existan secuencias inhibidoras de splicing en el elemento Alu. |
| Databáze: |
OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
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