Production of recombinant NS1 protein and its possible use in encephalitic flavivirus differential diagnosis

Autor: María Soledad Collado, Matías Sebastián Lorch, R. P. Rota, Mario Enrique Lozano, Lorena Spinsanti, Sandra Elizabeth Goñi, Marcelo Horacio Argüelles
Rok vydání: 2018
Předmět:
0106 biological sciences
viruses
NS1
Encephalitis Virus
St. Louis
Gene Expression
Viral Nonstructural Proteins
Antibodies
Viral
01 natural sciences
Chromatography
Affinity
law.invention
Serology
Mice
law
Antibody Specificity
Cloning
Molecular
Antigens
Viral
Inclusion Bodies
0303 health sciences
biology
medicine.diagnostic_test
virus diseases
SEROLOGICAL DIAGNOSIS
Recombinant Proteins
Flavivirus
Saint Louis encephalitis
Recombinant DNA
Antibody
West Nile virus
CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS
Biotechnology
Blotting
Western
Genetic Vectors
Argentina
Cross Reactions
Virus
Ciencias Biológicas
Diagnosis
Differential
03 medical and health sciences
Western blot
010608 biotechnology
medicine
Escherichia coli
Animals
Humans
030304 developmental biology
Encephalitis
St. Louis
SAINT LOUIS ENCEPHALITIS VIRUS
biochemical phenomena
metabolism
and nutrition
biology.organism_classification
medicine.disease
Virology
WEST NILE VIRUS
Solubility
Polyclonal antibodies
biology.protein
RECOMBINANT PROTEIN
Virología
West Nile Fever
Zdroj: Protein expression and purification. 153
ISSN: 1096-0279
Popis: Saint Louis encephalitis virus (SLEV) and West Nile virus (WNV) are two of the major causes of arboviral encephalitis in the Americas. The co-circulation of related flaviviruses in the Americas and prior vaccination against flaviviruses pose problems to the diagnostic specificity of serological assays due to the development of cross-reactive antibodies. An accurate diagnosis method capable of differentiating these related viruses is needed. NS1 is a glycosylated, nonstructural protein, of about 46 kDa which has a highly conserved structure. Anti-NS1 antibodies can be detected within 4?8 days after the initial exposure and NS1 is the least cross-reactive of the flaviviral antigens. This study was aimed to generate SLEV and WNV NS1 recombinants proteins for the development of a flavivirus diagnostic test. Local Argentinian isolates were used as the source of NS1 gene cloning, expression, and purification. The protein was expressed in Escherichia coli as inclusion bodies and further purified by metal-chelating affinity chromatography (IMAC) under denaturing conditions. Human sera from SLEV and WNV positive cases showed reactivity to the recombinant NS1 proteins by western blot. The unfolded NS1 proteins were also used as immunogens. The polyclonal antibodies elicited in immunized mice recognized the two recombinant proteins with differential reactivity. Fil: Lorch, Matías Sebastián. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Ingeniería Genética y Biología Molecular y Celular; Argentina Fil: Collado, Maria Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Ingeniería Genética y Biología Molecular y Celular; Argentina Fil: Argüelles, Marcelo Horacio. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Rota, Rosana Paola. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Ingeniería Genética y Biología Molecular y Celular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Spinsanti, Lorena Ivana. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Instituto de Virología Dr. J. M. Vanella; Argentina Fil: Lozano, Mario Enrique. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Ingeniería Genética y Biología Molecular y Celular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Goñi, Sandra Elizabeth. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Ingeniería Genética y Biología Molecular y Celular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Databáze: OpenAIRE
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