Detecção do polimorfismo genetico de Streptococcus mutans isolados de individuos livres de carie (CPOD=0)
| Autor: | Rosa, Rosimeire Takaki |
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| Přispěvatelé: | Gonçalves, Reginaldo Bruno, 1966, Spolidorio, Denise M. Palomari, Höfling, José Francisco, Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Odontologia de Piracicaba, Programa de Pós-Graduação em Biologia e Patologia Buco-Dental, UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS |
| Rok vydání: | 2021 |
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| Zdroj: | Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) instacron:UNICAMP |
| Popis: | Orientador : Reginaldo Bruno Gonçalves Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba Resumo: A presente pesquisa teve por objetivo analisar a variabilidade infraespecífica de cepas de Streptococcus mutans isoladas de indivíduos livres de cárie. Foram coletadas amostras de saliva total não estimulada, placa dental e de dorso de língua de indivíduos que apresentavam índice CPOD igual a zero. Após dispersão e diluição seriada das amostras, alíquotas de cada diluição foram inoculadas em meio Mitis Salivarius Bacitracina Agar (MSB). Após incubação em estufa de pC02 10% a 37°C, foram isoladas do meio colônias com morfologia típica de estreptococos, para posterior identificação por provas bioquímicas. As amostras foram incubadas em caldo de Infusão de Cérebro e Coração (BHI), centrifugadas e lavadas, sendo os sedimentos obtidos submetidos ao processo de extração das proteínas intracelulares. Os extratos protéicos foram separados por eletroforese em gel de amido e corados especificamente para a detecção do polimorfismo isoenzimático. Os géis foram analisados através dos sistemas enzimáticos: leucina aminopeptidase (LAP), manitol 1-fosfato desidrogenase (MIP), manose fosfato isomerase (MPI), nucleosídio fosforilase (NSP), fenilalanil leucina peptidase (PLP) e transaminase glutâmico-oxalacética (GOT). A análise comparativa dos perfis da eletroforese de isoenzimas (Multilocus Enzyme Electrophoresis-MLEE) dos isolados, acessada pela soma de todos sistemas enzimáticos, permitiu observar a ocorrência de dois ou mais clones de S. mutans nos diferentes sítios nestes voluntários. Os resultados obtidos mostram que pode ser encontrado mais de um tipo genético de S. mutans colonizando os diferentes sítios em um mesmo indivíduo Abstract: The current research had as aim to analyze the infra-specific variability of Streptococcus mutans strains obtained from caries-free individuals. Non-stimulated whole saliva, dental biofilm and tongue dorsum samples were collected from subjects with DMFT = O. After dispersing and decimal dilutions, aliquots from each dilution were inoculated in Mitis Salivarius Bacitracin (MSB) agar plates, in duplicate. After growing at pCO2 100,/0 and 37°C, it was taken some S. mutans suspect colonies that were biochemically identified. S. mutans-positive colonies were grown in Brain Heart Infusion (BHI) broth, they were centrifuged and washed. The pellets were submitted to cell disruption and protein extraction. Protein extracts were separated by starch gel electrophoresis and specifically stained in order to obtain the isoenzymic polymorphism. The gels were analyzed for enzymatic systems: leucine amino peptidase (LAP), mannitol-l-phosphate dehydrogenase (MIP), mannose phosphate isomerase (MPI), nucleoside phosphorylase (NSP), phenylalanyl leucine peptidase (PLP) e glutamic-oxalacetic transaminase (GOT). The comparative analysis of MLEE profiles assessed by the sum of all enzymatic systems allowed the observation of occurrence of one or more S. mutans dones, varying in the different intra oral sites among these volunteers. The obtained results showed that it may be found more than one genetic type of such S. mutans colonizing different sites in a same subject Mestrado Mestre em Biologia e Patologia Buco-Dental |
| Databáze: | OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
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