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Le developpement de therapies ciblees anticancereuses vise a reduire les effets secondaires des drogues chez les patients. Ce projet vise a developper des aptasomes vecteurs d’agents therapeutiques ciblant CD44 (Ag surexprime a la surface de nombreuses tumeurs) et radiomarques pour etude de leur biodistribution en TEP. Methodes Un film lipidique incluant du DSPE-PEG(2000)-NH2 est hydrate pour formuler des liposomes amines, puis un groupement pSCN-Bn-NOTA est conjugue aux amines sur les liposomes (Lip-NOTA). Apres optimisation des conditions de chelation (111In et CuII, en CCM absorbance et conductimetrie), l’aptamere anti-CD44 Apt1 est insere sur la couche externe des liposomes pour introduire la fonction de ciblage (Apt1-Lip-NOTA). Enfin, sont evaluees la toxicite liee a la capture du CuII (test MTT) et la captation specifique des Apt1-Lip-NOTA en presence d’Apt1 sur des cellules tumorales (FACS apres introduction de fluoresceine a la surface des aptasomes). Resultats Les analyses DLS et Zeta montrent les introductions successives du NOTA et de Apt1 : diametre croissant (autour de 100 nm), chutes du potentiel Zeta. Un agent fluorescent specifique des oligonucleotides corrobore l’introduction d’Apt1. Les conditions de chelation optimales (40 °C, pH neutre, metal et Lip-NOTA equimolaires) ont permis un rendement de marquage > 97 %. La toxicite du cuivre chelate en surface des liposomes est negligeable (survie cellulaire > 85 % a 72 h). En FACS, le signal reste proche de l’auto-fluorescence en l’absence d’Apt1 et, en sa presence, on observe un shift en fluorescence montrant l’accumulation des liposomes sur la lignee CD44+ (MDA-MB-231). Ces resultats seront corrobores en microscopie confocale. Conclusion Les aptasomes sont prets pour radiomarquage au 64Cu pour etudes de biodistribution dans 3 modeles murins (sain, xenogreffes de patients CD44− ou CD44+ [Institut Curie]) afin de verifier l’accumulation accrue des Apt1-Lip-NOTA dans les tumeurs CD44+ par rapport a l’effet EPR (Lip-NOTA). |
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