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Introduction Plusieurs mutations des PDE4D, une des quatre sous-familles PDE4 impliquees specifiquement dans la degradation de l’AMPc ont ete identifiees dans l’acrodysostose sans resistance hormonale. Le phenotype osseux indique une perte d’activation de la voie cAMP-PKA. Le but du travail est de caracteriser les consequences fonctionnelles de ces mutations. Materiels et methodes Quatre mutations des PDE4D, localisees dans trois domaines fonctionnels caracterisant cette famille, ont ete introduites par mutagenese dirigee dans le plasmide pcDNA3-hPDE4D3. La fonction des PDE4D est mesuree apres transfection transitoire dans les cellules CHO, en condition basale, stimulee, avec ou sans inhibiteur specifique (rolipram) via : – la mesure de l’activite PDE4D (technologie de BRET via l’utilisation d’un biosensor EPAC et mesure de l’hydrolyse d’AMPc-H3) ; – la mesure de l’activite de la PKA (systeme rapporteur CRE-luciferase). Resultats L’expression des proteines mutees est similaire a celle de la PDE4D sauvage. Les mutants ont une activite augmentee par rapport au sauvage par technique de BRET et par mesure d’hydrolyse d’AMPc-H3. L’activite PKA est inhibee par les mutants. Cette inhibition est reversee de facon concentration-dependante par le rolipram, avec une sensibilite au rolipram des mutants diminuee par rapport au sauvage. Quelle que soit la localisation des mutations, les resultats sont similaires. Discussion/conclusion Les 4 mutants PDE4D etudies entrainent une augmentation de l’activite PDE4D en condition basale et stimulee et modifient leur sensibilite au rolipram. Ces resultats sont compatibles avec un gain de fonction des PDE4D mutees causant une perte d’activation de la voie cAMP-PKA. |
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