Исследование роли сигма-1 рецептора в формировании ÑÐ¸Ð½Ð°Ð¿Ñ‚Ð¸Ñ‡ÐµÑÐºÐ¸Ñ ÐºÐ¾Ð½Ñ‚Ð°ÐºÑ‚Ð¾Ð² нейронов стриатума на модели болезни Хантингтона

Jazyk: ruština
Rok vydání: 2016
Předmět:
DOI: 10.18720/spbpu/2/v16-2158
Popis: Кортико-стриатальные клеточные культуры были оптимизированы с целью смоделировать болезнь Хантингтона in vitro. Методом Ð¸Ð¼Ð¼ÑƒÐ½Ð¾Ñ†Ð¸Ñ‚Ð¾Ñ Ð¸Ð¼Ð¸Ñ‡ÐµÑÐºÐ¾Ð³Ð¾ окрашивания показана элиминация шипиков нейронов стриатума на 21 день культивирования в ÐºÑƒÐ»ÑŒÑ‚ÑƒÑ€Ð°Ñ Ð¼ÑƒÑ‚Ð°Ð½Ñ‚Ð½Ð¾Ð³Ð¾ типа YAC128, не наблюдаемая в ÐºÑƒÐ»ÑŒÑ‚ÑƒÑ€Ð°Ñ Ð´Ð¸ÐºÐ¾Ð³Ð¾ типа (WT). Разработан количественный анализ фенотипического проявления болезни путём подсчёта и оценки формы шипиков на постсинаптической стороне с помощью компьютерного программного обеспечения Neuron Studio. Продемонстрировано увеличение плотности шипиков в ÐºÑƒÐ»ÑŒÑ‚ÑƒÑ€Ð°Ñ Ð¼ÑƒÑ‚Ð°Ð½Ñ‚Ð½Ð¾Ð³Ð¾ типа при добавлении в культуральную среду агониста сигма-1 рецептора 3-Ð Ð Ð . Нокдаун сигма-1 рецептора вызвал элиминацию шипиков в ÐºÑƒÐ»ÑŒÑ‚ÑƒÑ€Ð°Ñ Ð´Ð¸ÐºÐ¾Ð³Ð¾ типа и дальнейшее уменьшение плотности шипиков в YAC128 ÐºÑƒÐ»ÑŒÑ‚ÑƒÑ€Ð°Ñ . При этом отмечено изменение соотношения Ñ€Ð°Ð·Ð»Ð¸Ñ‡Ð½Ñ‹Ñ Ð²Ð¸Ð´Ð¾Ð² шипиков. Отсутствие эффекта восстановления плотности шипиков после добавления 3-РРРв культуральную среду нейронов с нокдауном сигма-1 рецептора доказало специфичность его воздействия именно на исследуемый рецептор. С помощью отмывки активирующего агента с последующей фиксацией клеток и подсчётом плотности шипиков определена длительность эффекта активации сигма-1 рецептора, оказавшаяся равной примерно 8 часам в Ñ€Ð°Ð¼ÐºÐ°Ñ Ð¸ÑÑÐ»ÐµÐ´ÑƒÐµÐ¼Ð¾Ð¹ модели. Полученные результаты статистически обработаны и представлены в виде графиков и ÑÑ‚Ð¾Ð»Ð±Ð¸ÐºÐ¾Ð²Ñ‹Ñ Ð´Ð¸Ð°Ð³Ñ€Ð°Ð¼Ð¼.
Cortico-striatal cell culture was optimized to model Huntington's disease in vitro. On the 21st day of in vitro cultivation spine elimination of striatal neurons was shown by the method of immunocytochemistry in mutant cultures (YAC128) but not in wild type (WT) ones. Quantitative analysis was worked out to evaluate phenotypic expression of the disease. Spine counting and its shape analysis were performed automatically by Neuron Studio program. Spine rescue in YAC128 cultures was shown after sigma-1 receptor's agonist 3-PPP exposure. Knockdown of sigma-1 receptor caused spine elimination both in YAC128 and WT cultures. Herein change in the ratio of different spine types was marked. No spine rescue effect after 3-PPP exposure to knockdown cell cultures evidenced for its specific action on sigma-1 receptor. Washing 3-PPP out and cell fixing with further spine counting made it possible to estimate time of spine rescue effect which occurred to be 8 hours approximately within the framework of the working model. The results were statistically processed and presented as graphs and bar charts.
Databáze: OpenAIRE
Externí odkaz: