PCR multiplex sur le LightCycler utilisant des sondes d'hydrolyse et d'hybridation : application à la quantification du provirus VIH-1

Autor: Christine Rouzioux, Patrice Morand, M Burgard, K. Brengel-Pesce, JM Seigneurin, G Barguès
Rok vydání: 2001
Předmět:
Zdroj: Immuno-analyse & Biologie Spécialisée. 16:113-118
ISSN: 0923-2532
DOI: 10.1016/s0923-2532(01)80063-6
Popis: Resume L'efficacite virologique des multitherapies antiretrovirales est actuellement definie par la reduction durable et forte de la charge virale plasmatique (ARN VIH). La quantification de l'ADN proviral apporte une information complementaire sur les reservoirs du virus dans l'organisme. Nous avons mis au point une PCR quantitative en temps reel du provirus VIH-1 (amorces et sonde consensus ANRS-AC11) dans les cellules mononucleees sanguines en utilisant le LightCycler. La strategie elaboree associe une sonde d'hydrolyse de type TaqMan pour la quantification du VIH-1 et des sondes d'hybridation fluoresceine/Red 705 pour la detection d'un controle interne d'amplification (gene β-globine). Les resultats de cette etude montrent que la coamplification avec le gene de la β-globine n'interfere pas avec la quantification du VIH-1 et que la sensibilite est de 5 copies pour la PCR VIH-1. Nous obtenons une bonne correlation avec une technique de PCR competitive (Δ log = 0, 19). La possibilite d'utiliser simultanement une sonde d'hydrolyse et des sondes d'hybridation permet d'elargir les capacites d'analyses du LightCycler pour d'autres applications.
Databáze: OpenAIRE
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