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La extraccion apropiada de ADN en los insectos es un factor limitante debido a la presencia de inhibidores que afectan los estudios geneticos basados en la reaccion en cadena de la polimerasa (PCR) y marcadores moleculares, por lo que es importante utilizar metodos que permitan obtener cantidades suficientes de ADN con alta pureza, calidad, y concentracion. Se evaluaron cinco protocolos de extraccion de ADN, CTAB, H. Guanidina, Buffer STE, Buffer de lisis y kit Qiagen, en larvas de Spodoptera frugiperda (J.E. Smith). A partir del ADN obtenido, se evaluo calidad, pureza, concentracion y costo, lo que permitio seleccionar la mejor metodologia para identificacion de biotipos del insecto plaga mediante PCR-RFLP. Las concentraciones promedio fueron 1158.5, 404, 610, 188.7 y 25.9 ng/μl para los metodos de extraccion de ADN, CTAB, H. Guanidina, Buffer STE, Buffer de lisis, y kit Qiagen, respectivamente. El ADN obtenido con el Buffer STE presento mayor cantidad de impurezas proteicas y restos celulares (A260/A280 = 1.37), seguido de Buffer de lisis, H. Guanidina, kit Qiagen, y CTAB (1.74, 2.13, 1.89, y 1.85). El kit Qiagen fue el mejor metodo de extraccion en cuanto a pureza y calidad, pero mostro una concentracion baja, mientras que con el metodo CTAB se obtuvo una concentracion mayor y una pureza confiable, en ambos metodos se obtuvo el 100% en la amplificacion de fragmentos de 569 pb del gen COI de S. frugiperda. Los mejores resultados se obtuvieron usando los metodos CTAB y kit Qiagen. El metodo CTAB es el recomendado en este estudio porque se obtiene una mayor concentracion, calidad requerida, y bajo costo en la extraccion del ADN, ademas de lograr la deteccion e identificacion molecular de biotipos de gusano cogollero del maiz Spodoptera frugiperda colectados en Sinaloa, Mexico. Todos los metodos de extraccion del ADN evaluados, fueron eficaces para la identificacion de los biotipos de gusano cogollero mediante analisis PCR-RFLP. |
