An Efficient Microinoculation Procedure to Study Plant Virus Multiplication at Predetermined Individual Infection Sites on the Leaves

Autor: B. Fritig, G. Konate
Rok vydání: 1984
Předmět:
Zdroj: Journal of Phytopathology. 109:131-138
ISSN: 1439-0434
0931-1785
DOI: 10.1111/j.1439-0434.1984.tb00700.x
Popis: The microinoculation procedure (inoculated are 0.02—0.05 mm2 was carried out using the very thin tip of a stretched Pasteur pipette. It was dipped in a 500 μg/ml suspension of purified TMV, brought into contact with the upper epidermis of the leaf which had been dusted With an abrasive and rotated twice without actually pricking the leaf tissue. Five minutes later, the excess abrasive and virus were removed by rinsing the leaves under water. The procedure was applied to several tobacco-TMV combinations. It induced the formation of single local lesions with over 90% efficiency on hypersensitively reacting hosts. Comparable efficiencies were obtained with systemically reacting hosts, as evidenced by a radiochemical procedure coupled with indirect ELISA (KONATE and FRITIG 1983). It was found that residual virus originating from the inoculum was negligible and could casily be distinguished form newly synthesized virus, even shortly after the microinoculation. This makes it possible to measure the rates of virus cell-to-cell spread and of virus multiplication at various times after inoculation and at various distances form the points of virus entry. These approadies can be extended to the comparison between differently reacting hosts and to the study of interference between different viruses or different virus strains. Zusammenfassung Ein wirkungsvolles Mikroinokulationsverfahren, um die Vermehrung von Pflanzenviren an vorherbestimmten einzelnen Infektionsorten auf den Blattern zu untersuchen Das Mikroinokulationsverfahren (Inokulationflache ca. 0.02—0.05 mm2) ist mit einer ausgezogenen Pasteur-Pipette durchgefuhrt worden. Diese Pasteur-Pipette wird in eine gereinigte Virussuspension (500 μg/ml) eingetaucht und wird dann in Beruhrung gebracht mit dem Epidermis des Blattes, das zucrst mit Sdieuermittel (celite) bestrent worden ist. Nach 5 Minuten warden die Blatter mit Wasser abgewaschen, um sie von uberschussigem schcurmittel und Virus zu befreien. Diese Prozedur wurde bei verschiedenen Tabak-TMV-Kombinationen angewandt. Sie induzien die Bildung von cinzelnen Lasionen mit 90% Wirkasmkeit auf hyperergische Wirtblatter. Vergleichbare Wirksamkeiten warden erreicht mit empfindlichen Wirten, wie durch radiochemische Untersuchungen, die mit dem indirekten ELISA-Test gehoppelt waren, bewiesen (KONATE und FRITING 1983). Es ist festgestellt worden, des die Menge an vom lnokulum zuruckeblicbenen Virus nicht zu berucksichtigen war. Man kann sie leicht von dem nea synthetisierten virus unterscheiden, sogar kurz nach der Inokulation. So KaoOnnen wir die Raten des von Zelle zu Zelle vorbreiteten Virus und der Virusvermehrung bei verschiedenen Zeiten nach der Inokulation und bei verschiedenen Distanzen von dem Punkt des Viruseinganges messen. Die gleichen Methoden konnen angewandt warden, um Wirte zu vergleichen, die unterschiedlich reagieren, und auch um die Wechselwirkungen zwischen verschiedenen Viren oder virusstammen zu studieren.
Databáze: OpenAIRE
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