| Popis: |
На сперматозоидах быков исследовали участие протеинкиназ А и С в активации процессов капацитации. Знание внутриклеточных механизмов, связанных с капацитацией, позволит воздействовать на сперматозоиды для улучшения результатов оплодотворения. С использованием ХТЦ-теста, определяющего местоположение флуоресценции хлортетрациклина в сперматозоидах, изучали их распределение на группы с различным функциональным статусом некапацитированные, капацитированные и акросома-реактивные. Исследовали сперму от трех быков, не менее 200 сперматозоидов в каждой группе. В качестве ингибитора протеинкиназы С использовали соединение Ro 31-8220 (10 нг/мл), ингибитора протеинкиназы А Н-89 (10 мкМ). Оценивали воздействие на сперматозоиды веществ, стимулирующих выход Са2+ из внутриклеточных депо и способствующих капацитации: дибутирил циклического аденозинмонофосфата (дбцАМФ, 100 мкМ) и гуанозинтрифосфата (ГТФ, 10 мкМ) в присутствии прогестерона (1 мкг/мл). Количество капацитированных сперматозоидов с дбцАМФ + ГТФ в вариантах без ингибитора и с ингибитором протеинкиназы С не имело значимых отличий 47,3 ± 2,4 и 42,5 ± 1,6 % соответственно. Ингибитор протеинкиназы А существенно снижал число капацитированных сперматозоидов при инкубации с дбцАМФ и ГТФ до 23,1±1,8 %, по сравнению с вариантом без ингибитора. Интенсивность флуоресценции кальция внутриклеточных депо определяли с помощью флуоресцентного зонда хлортетрациклина. В присутствии дбцАМФ + ГТФ в вариантах без ингибитора и с ингибитором протеинкиназы С она не имела значимых отличий 72,3 ± 1,6 и 70,0 ± 1,9 % соответственно. Ингибитор протеинкиназы А отменял дополнительное освобождение Са2+ из внутриклеточных депо сперматозоидов, активированное совместным действием дбцАМФ и ГТФ. Интенсивность флуоресценции хлортетрациклина в присутствии дбцАМФ + ГТФ была значимо выше в варианте с ингибитором протеинкиназы А, чем без ингибитора 85,0 ± 1,7 и 72,3 ± 1,6 % соответственно. Следовательно, протеинкиназа А увеличивает количество капацит ированных сперматозоидов при совместном действии дбцАМФ и ГТФ. |
