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Objet C. glabrata est capable de survivre et de se multiplier a l’interieur des phagocytes. Cette caracteristique implique que la levure ait developpe des mecanismes d’echappement aux systemes de defense de la cellule hote et notamment a la production d’especes reactives de l’oxygene mise en place par les phagocytes. L’etude de cette reaction vis-a-vis de C. glabrata n’a ete que tres peu exploree et fait l’objet du projet en cours. Materiel et methodes Nous avons developpe des protocoles permettant de differencier la lignee PLB-985 en cellules de type neutrophile apres traitement au DMSO ou en macrophages en utilisant l’1α25-Dihydroxyvitamine-D3 et le Phorbol myristate acetate (PMA). Pour les experiences de phagocytose, la souche C. glabrata CBS138 a ete utilisee. La mesure de ROS global a ete effectuee par luminometrie durant une phagocytose de 30 minutes avec un MOI de 0,5. La phagocytose a ete testee avec les levures preincubees ou non avec du complement. Le burst oxydatif intraphagosomal a ete mesure par cytometrie en flux, induit lors de la phagocytose de particules marquees (S. cerevisiae ou C. glabrata mort) par le Dichlorodihydrofluoresceine (DCFH2). Resultats Les PLB-985 macrophages ont un phenotype adherent et expriment CD11b et CD14 contrairement aux PLB-985 neutrophiles. Le burst oxydatif intraphagosomal est plus eleve chez le neutrophile que chez le macrophage. Chez le neutrophile, la production intraphagosomale de ROS est similaire apres phagocytose de particules de S. cerevisiae ou C glabrata. Avec les PLB-985 neutrophiles, la phagocytose de C. glabrata vivante indique une correlation entre l’etat d’opsonisation de la levure et la production globale (intracellulaire et extracellulaire) de ROS. Cependant, le seuil de detection par luminometrie reste pour l’instant trop eleve pour permettre la detection de ROS global produit par les macrophages. Conclusion Le developpement de nouveaux outils est necessaire pour analyser le stress oxydant phagosomal dans la defense immunitaire contre C. glabrata. Parmi les prochaines etapes de ce travail, nous envisageons d’etudier le role du radical HOCl dans le stress oxydant subi par C. glabrata. Pour cela, une souche de C. glabrata exprimant la GFP au niveau de la paroi est en cours de construction. |
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