Optimization of the fusion protein rhIL7-BAPmut renaturation process from the Escherichia coli inclusion bodies and its practical application
| Autor: | M. V. Koval’chuk, M. O. Usenko, D. M. Irodov, O. V. Okunev, O. B. Gorbatiuk, V. A. Kordium, K. I. Bentsionova |
|---|---|
| Rok vydání: | 2019 |
| Předmět: | |
| Zdroj: | Visnik ukrains'kogo tovaristva genetikiv i selekcioneriv. 17:38-44 |
| ISSN: | 2415-3680 1810-7834 |
| DOI: | 10.7124/visnyk.utgis.17.1.1199 |
| Popis: | Мета. Метою нашої роботи була оптимізація методу ренатурації злитого білка rhIL7-BAPmut, створеного на основі рекомбінантного інтерлейкіну-7 людини (rhIL7) та бактерійної лужної фосфатази з підвищеними каталітичними властивостями (BAPmut), для його отримання у функціонально активній формі. Методи. Клітини E. coli BL21(DE3) трансформували плазмідним вектором pET24-IL7-BAPmut. Синтез білка індукували за протоколом аутоіндукції. Для ренатурації білка з бактерійних тілець включення in vitro застосовували іммобілізуючу металоафінну хроматографію (IMAX) та метод плавного розведення. Результати. Поєднання методів IMAX та плавного розведення в присутності аргініну, GSH/GSSG та іонів Mg2+ забезпечило отримання rhIL7-BAPmut в очищеній функціонально-активній формі. Біфункціональну активність rhIL7-BAPmut після ренатурації підтверджували імунохімічними методами шляхом зв’язування зі специфічними антитілами. Висновки. Було показано, що застосування rhIL7-BAPmut дозволяє значно скоротити час скринінгу імунної комбінаторної бібліотеки кДНК варіабельних генів імуноглобулінів і не потребує використання специфічних первинних і вторинних антитіл. Злитий білок rhIL7-BAPmut може також використовуватись для якісного та кількісного аналізу рецепторів IL-7.Ключові слова: IL-7, BAPmut, бактерійні тільця включення, ренатурація. |
| Databáze: | OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
|