| Autor: |
A. Falero Morejón, E. Pimienta Rodríguez, S. Rodríguez Salgueiro, O. Ancheta Niebla, Y. Serrano Rivero, K. Marro Domínguez, S.M. Brito Molina |
| Rok vydání: |
2020 |
| Předmět: |
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| Zdroj: |
Vacunas. 21:82-89 |
| ISSN: |
1576-9887 |
| DOI: |
10.1016/j.vacun.2020.06.002 |
| Popis: |
Resumen Objetivo Purificar la proteina L1 del virus del papiloma humano 16 (VPH-16) codificada por un gen L1 clonado de una muestra de cancer cervical de una paciente cubana y fusionada por su extremo carboxilo a una cola de histidinas (L1-His), a partir de Escherichia coli SHuffle® T7. Metodos La cepa E. coli SHuffle® T7 transformada con el plasmido pETHPV16L1myc-His se empleo para producir la proteina L1-His del VPH-16 cultivada en condiciones de autoinduccion. La proteina L1-His se purifico mediante cromatografia de afinidad de quelatos de iones Ni2+ (IMAC-Ni2+) tras extraccion de los cuerpos de inclusion (CI) con urea 8 M y posterior renaturalizacion por dilucion inversa. La talla molecular de la proteina L1-His renaturalizada se evaluo mediante electroforesis nativa y cromatografia de exclusion molecular. Resultados La proteina L1-His del VPH-16 se acumulo en CI en E. coli SHuffle® T7, representando ∼ 12% de las proteinas totales. Se purifico mediante IMAC-Ni2+ en condiciones desnaturalizantes, con una pureza de ∼ 90% y un rendimiento de ∼ 40%. La renaturalizacion de la L1-His purificada permitio obtener ∼ 9 mg de pentameros/L de cultivo, con un rendimiento final del proceso de ∼ 62%. Conclusiones En este trabajo se describio por primera vez la purificacion de pentameros de la proteina L1-His del VPH-16, codificada por un gen L1 clonado de una muestra de cancer cervical de una paciente cubana, a partir de los CI de E. coli SHuffle® T7. La estrategia desarrollada podria ser una alternativa para la obtencion de capsomeros de L1-His, para desarrollar un candidato vacunal contra el VPH-16. |
| Databáze: |
OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
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