| Popis: |
Resume Nous proposons une methode simple et rapide pour la discrimination entre les genes des β-lactamases a spectre etendu (BLSE) de type SHV chez P. aeruginosa en se basant sur des techniques de PCR (PCR-RFLP et RSI-PCR). Nous avons etudie 22 isolats de P. aeruginosa producteurs de BLSE, isoles de prelevements cliniques effectues chez sept patients immunodeprimes (19 isolats) et de prelevements environnementaux (trois isolats) au Centre national de greffe de moelle osseuse de Tunis. L’amplification PCR de screening utilisant des paires d’amorces detectant les genes codant pour les β-lactamases du groupe TEM, SHV, OXA groupe I, OXA groupe II, OXA-18 et PER-1 a permis l’amplification des genes blaOXA18 et blaSHV parmi toutes ces souches. L’electrophorese en champ pulse utilisant l’endonuclease SpeI a identifie cinq groupes genotypiques. La digestion des produits PCR des cinq souches representatives des differents genotypes par DdeI et BsrI a montre des profils de restriction identiques a celui du temoin negatif blaSHV-1 ; de meme que la digestion des produits de RSI-PCR par NruI, temoignant de l’absence des mutations 35, 238 et 240, caracteristiques des BLSE decrites chez P. aeruginosa (SHV-2a, SHV5 et SHV12) et suggerant que les genes blaSHV etudies ne codaient pas pour des BLSE. L’hybridation de l’ADN genomique par southern blot avec une sonde contenant le gene blaSHV-1 a ete positive avec toutes les souches. Le sequencage du cadre de lecture entier a identifie la sequence comme celle de blaSHV-1. Les resultats de la PCR-RFLP et de l’RSI-PCR ont ainsi ete confirmes. Cette approche est efficace pour le screening des souches de P. aeruginosa hebergeant un gene de BLSE de type SHV lors des etudes epidemiologiques et pour detecter de nouveaux variants. |
Full Text from ScienceDirect