Développement d’une méthode de quantification de ARN messagers par RT-PCR dans les biopsies testiculaires

Autor: N. Berger-Dutrieux, M. Devonec, Hervé Lejeune, J C Crave, Philippe Durand, Rachel Levy, Michel Pugeat, C. Brébant, J.M. Saez
Rok vydání: 1996
Předmět:
Zdroj: Andrologie. 6:370-373
ISSN: 1760-5377
1166-2654
DOI: 10.1007/bf03035292
Popis: Afin de mieux comprendre l'implication des facteurs de regulation de la spermatogenese en pathologie humaine, nous avons developpe une methode de mesure des ARN messagers (ARNm) par reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR), applicable a des fragments testiculaires de petite taille, tels que ceux obtenus lors des biopsies testiculaires. Nous presentons ici les aspects methodologiques developpes pour repondre aux contraintes liees: Les developpements methodologiques ont ete effectues a partir des testicules preleves chez un sujet en etat de mort cerebrale (histologie normale) et de 3 testicules pathologiques obtenus lors de castration pour cancer de la prostate et presentant des troubles de la spermatogenese. Nous avons mesure l'expression de genes marqueurs de divers types cellulaires, clusterine pour les cellules de Sertoli, cytochrome P450 side chain cleavage (CyP450scc) pour les cellules de Leydig, protamine-1 pour les cellules germinales post-meiotiques; et d'un facteur para/autocrine testiculaire, la sous unite α de l'inhibine, par rapport a la s-actine. Les methodes developpees permettent d'obtenir une mesure relative d'un ARNm d'interet par rapport a un ARNm de reference a partir de 0,1 μg d'ARN total (au lieu de 10–40 μg en Northern Blot). La mesure des ARNm de l'α-inhibine dans des ARN testiculaires dilues par des ARN d'une lignee cellulaire n'exprimant pas l'α-inhibine (HepG2) montre une bonne correlation avec les valeurs attendues (r=0,989; p=0,0015) et une bonne correlation entre RT-PCR et Northern Blot (r=0,995; p=0,0005). En comparant l'expression des genes etudies dans les echantillons pathologiques par rapport au sujet controle, on observe une bonne correlation entre RT-PCR et Northern blot (r=0,914; p=0,0002). Nos resultats concordent avec les constatations histologiques: absence d'expression de la protamine-1 dans les troubles severes de la spermatogenese, augmentation de l'expression du CyP450scc en cas d'hyperplasie leydigienne. L'expression de l'α-inhibine est en relation avec la proportion de cellules somatiques dans les echantillons. Ceci indique la necessite d'une mesure relative de l'expression des facteurs paracrines, par rapport a des marqueurs specifiques de chaque type cellulaire du testicule. Ces methodes vont permettre des etudes de l'expression des genes des facteurs regulateurs de la spermatogenese sur les biopsies testiculaires realisees lors des soins de l'infertilite des patients.
Databáze: OpenAIRE
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