Untersuchung von Protein-Chaperon-Wechselwirkungen mit Einzelmolekülspektroskopie

Autor: Marcus Textor, Michelle Grandin, Benjamin Schuler, Daniel Nettels, Sonja Geister, Dominik Hänni, Frank Hillger
Rok vydání: 2008
Předmět:
Zdroj: Angewandte Chemie. 120:6279-6283
ISSN: 1521-3757
0044-8249
DOI: 10.1002/ange.200800298
Popis: Molekulare Chaperone sind ein essenzieller Bestandteil der zellul!ren Proteinfaltungsmaschinerie. Besonders bemerkenswert sind die Chaperone der Hsp60-Klasse, zu der auch das bakterielle GroEL/ES-System z!hlt, die das sich faltende Protein in einem Hohlraum einschliesen. In den vergangenen zwei Jahrzehnten wurden viele der daran beteiligten Prozesse aufgekl!rt. "ber den Einfluss des Chaperons auf die Konformationsverteilungen und Faltungsmechanismen seiner Substratproteine ist jedoch erstaunlich wenig bekannt. Die Heterogenit!t der nichtnativen Substratstrukturen im Komplex mit den molekularen Maschinen im Megadalton-Bereich gestaltet ihre experimentelle Untersuchung mit Ensemblemethoden schwierig. Einzelmolek#lspektroskopie, insbesondere in Kombination mit resonantem F$rster-Energietransfer (FRET), erm$glicht die Bestimmung nichtgemittelter Abst!nde und Orientierungen sowie die Beobachtung intramolekularer Abstandsdynamik im Gleichgewicht 5] und ist damit ein vielversprechender Ansatz, um derartige Fragestellungen anzugehen. Hier demonstrieren wir, wie Einzelmolek#l-FRET zur Untersuchung von nichtnativen Konformationen und der Dynamik von Rhodanese aus Rinderleber, einem klassischen Chaperonsubstratprotein, 8] nach Bindung an GroEL genutzt werden kann. Um charakteristische Transfereffizienzen zu erhalten, die eine Unterscheidung von nativen und nichtnativen Konformationen erm$glichen, wurden zwei Rhodanesevarianten mit komplement!ren Donorund Akzeptorpositionen untersucht. Abbildungen 1c–n zeigen Transfereffizienzhistogramme, die aus Photonensalven von einzelnen markierten Rhodanesemolek#len generiert wurden, w!hrend sie frei durch
Databáze: OpenAIRE
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