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Fur eine Saule mit einem Durchmesser von 2,2 cm werden 10 g Sephadex G-75 nach der Firmenvorschrift in einer Salzlosung gequollen, gewaschen und sehr sorgfaltig mit 0,002 M Tris-HC1-Losung mit 0,0005 M Mg++ equilibriert. Die Gelfiltration wird im Kuhlraum bei + 4°C ausgefuhrt. Ein typisches Elutionsdiagramm mit der Absorptionskurve bei 260 mμ Wellenlange, der Protein-, RN S- und P-Konzentration ist in der Abb. 2 wiedergegeben. Auser der Ribosomenfraktion sind noch zwei weitere kleine Proteinfraktionen anwesend. Ihr Molekulargewicht mus — der Leistung des benutzten Sephadex-Typs entsprechend — kleiner als 50 000 sein. Die Kurve fur die Orcin-Reaktion, deren Maxima jeweils mit denen der P-Bestimmungen zusammenfallen, zeigt neben der r-RNS noch eine weitere RNS oder auch einfache Nukleotide an. Die absorbierenden Komponenten in den Sephadex-Fraktionen II und III konnen nicht nur NS-Bausteine sein, weil die Maxima fur die Orcin- und P-Reaktionen in der Fraktion 32 zusammenfallen, wahrend das Absorptionsmaximum erst in der Fraktion 35 erscheint. Auserdem kommt noch ein zweites Absorptionsmaximum in der Fraktion 45 vor, in der kein Phosphor mehr nachweisbar ist. |
