Partial purification and characterization of a 235000Mr extracellular proteinase from Trichophyton rubrum

Autor: R. J. Hay, Imelda Lambkin, Andrew J. Hamilton
Rok vydání: 2009
Předmět:
Zdroj: Mycoses. 37:85-92
ISSN: 1439-0507
0933-7407
DOI: 10.1111/j.1439-0507.1994.tb00782.x
Popis: Summary. An extracellular proteinase has been partially purified from culture filtrates of Trichophyton rubrum by ultrafiltration, isoelectric focusing and gel filtration chromatography. The enzyme has a non-reduced molecular weight of 235000 by substrate SDS-PAGE. It has a pH optimum of 8.5 using azocasein and azoalbumin as substrates and a pI of 3.6-3.8. The metalloproteinase inhibitors EDTA and 1,10-phenanthroline, together with the chymotrypsin inhibitor chymostatin, strongly inhibited its activity. The serine proteinase inhibitors phenylmethanesulphonyl fluoride and diisopropylfluorophosphate showed weak inhibitory activity. The proteinase exhibited broad substrate activity against azocoll, azoalbumin, azocasein, laminin and fibronectin. It exhibited weak activity against elastin and keratin. Observations on the occurrence of this proteinase together with previously described lower molecular weight proteinases suggests that the former is the first to appear in minimal medium cultures. Freeze/thaw cycling of the partially purified 235000Mr proteinase was found to generate low molecular weight proteinases, particularly at 53000, 27000 and 25000Mr, indicating that the latter may originate from the larger molecule. Zusammenfassung. Aus Kulturfiltraten von Trichophyton rubrum wurde durch Ultrafiltration, isoelektrische Fokussierung und Gelfiltrationschromatographie eine extrazellulare Proteinase partiell gereinigt. Das Enzym hat nicht reduziert in der Substrat-SDS-PAGE ein Molekulargewicht von 235000. Bei Verwendung von Azocasein und Azoalbumin wurde ein pH-Optimum von 8,5 bestimmt; der pI liegt bei 3.6-3.8. Die Enzymaktivitat wurde durch die Metalloproteinase-Hemmer EDTA und 1,10-Phenanthrolin zusammen mit dem Chymotrypsin-Hemmer Chymostatin stark gehemmt. Die Serinproteinasen-Hemmer Phenylmethansulfonylfluorid und Diisopropylfluorphosphat zeigten nur schwache Hemmwirkung. Die Proteinase zeigte breite Substrataktivitat gegen Azocoll, Azoalbumin, Azocasein, Laminin und Fibronectin; sie zeigte schwache Aktivitat gegen Elastin und Keratin. Im Vergleich mit fruher beschriebenen niedrigmolekular-gewichtigen Proteinasen scheint das hier vorgestellte Enzym in Minimalmedium-Kulturen fruher aufzutreten. Wiederholtes Frieren-Auftauen der partiell gereinigten 235000Mr-Proteinase fuhrte zum Auftreten niedrigmolekulargewichtiger Proteinasen insbesondere von 53000, 27000 und 25000Mr, was darauf hindeutet, das die letzteren vom groseren Molekul abgespalten werden.
Databáze: OpenAIRE
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