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Objectif La validation analytique du screening toxicologique n’est pas clairement definie dans la norme NF EN ISO 15189. Seul le groupe de travail « Scientific Working Group for Forensic Toxicology » (SWGTOX) a propose une methodologie adaptee aux methodes qualitatives de type screening [1] . Cette methodologie a ete appliquee dans le but de valider notre methode de screening. Methodes Apres deproteinisation, les echantillons sanguins sont analyses par chromatographie liquide couplee a un spectrometre de masse haute resolution (LC-HRMS, QExactive Focus, Thermofisher Scientific). La separation est realisee sur une colonne Accucore Phenyl-Hexyl (100 × 2,1 mm, 2,6 μm). L’acquisition des donnees se fait pendant 15 minutes en mode Full-MS avec confirmation en dd-MS2. L’exploitation des donnees est realisee via le logiciel TraceFinder®. Cent soixante-quatorze molecules les plus frequemment identifiees au laboratoire ont ete choisies et reparties en 4 pools pour la validation. Les parametres evalues ont ete : les limites de detection (LOD) et d’identification (LOI), le rendement d’extraction (RE), l’effet matrice (ME), la selectivite et la contamination. La LOI correspond a la plus faible valeur de concentration permettant une confirmation de la presence d’une molecule basee sur : le rapport m/z de l’ion pseudo-moleculaire avec une precision de 5 ppm, le temps de retention (± 30 s), la presence de deux fragments majoritaires, un score de profil isotopique > 70 et un score de comparaison des spectres > 80. La LOD est evaluee avec les memes criteres sauf celui du score de comparaison des spectres. Les LOI et LOD ont ete validees en intra-jour (n = 6) et inter-jour (n = 4) a partir de surcharges a differents niveaux de concentration de sang vierge. Les ME et RE ont ete etudies selon l’approche quantitative (n = 10) a deux niveaux de concentrations. Resultats Les LOD et LOI ont pu etre determinees pour 97 % des molecules et sont comprises entre 0,125 et 1000 ng/mL avec des valeurs inferieures aux valeurs usuelles. Le RE moyen est de 114 ± 45 %. Aucun effet matrice n’a ete observe pour 69 % des molecules, d’apres les criteres du groupe SWGTOX (ME Conclusion Sur les 174 molecules testees, les criteres de validation sont conformes pour 120 molecules et les 54 autres molecules n’ont pas pu etre validees a cause d’un ME superieur aux recommandations. Une simple precipitation ne semble pas suffisante pour eliminer l’ensemble de ces ME. Ainsi, les recommandations americaines concernant l’effet matrice semblent difficiles a atteindre lorsqu’il s’applique a un tres large panel de molecules. D’apres notre experience, ceci est d’autant plus marque avec l’analyse de sang post-mortem en partie decompose et putrefie. Une methode d’extraction plus complexe et optimisee pourrait potentiellement permettre d’atteindre les criteres de ME du groupe SWGTOX. |
