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Proteínas quinases são importantes alvos de estudo devido ao seu envolvimento na sinalização celular, regulação da transcrição e da divisão celular, e devido a isso, estarem diretamente envolvidas com oncogenes e genes supressores de tumor, tendo portanto, potencial terapêutico na interação com inibidores. A progressão do ciclo de divisão celular é conduzida por ciclinas, que ligam e ativam seus parceiros catalíticos, as quinases dependentes de ciclina (CDKs). Sendo assim, as CDKs compreendem uma família de proteínas que podem ser subdivididas em dois grupos funcionais majoritários, baseados na sua função no ciclo celular e/ou controle transcricional. Já foram identificadas cerca de 20 CDKs humanas, baseado em similaridades nas sequências e na função. Os complexos heterodiméricos específicos de ciclina-CDK fosforilam uma infinidade de proteínas celulares, as quais promovem a entrada no ciclo celular, a regulação da transcrição gênica, e a segregação dos cromossomos recém-duplicados durante a mitose. A CDK11 está envolvida nos processos de controle do ciclo celular, na regulação da transcrição de RNA, no “splicing” de RNAm, apoptose, além da função neuronal. A presença da ciclina D3 é vital para a atividade quinase da CDK11p58, principalmente em relação a progressão do ciclo celular na fase G2/M. A proposta do presente projeto é a obtenção do complexo ciclina D3-CDK11, pela expressão heteróloga em E. coli. Estudos funcionais e estruturais da sua atividade quinásica irão colaborar para o entendimento da interação CDK11-ciclina D3, que poderá conduzir à descoberta de inibidores da atividade específica, e do entendimento do modo de interação intermolecular. Sendo assim, serão realizados ensaios da atividade enzimática na presença de inibidores avaliados por modelagem e docking molecular. É importante ressaltar que não há estrutura cristalográfica do complexo depositada no PDB. Os mesmos inibidores serão testados in vitro na presença do complexo CDK-ciclina isolado, bem como por ensaios em células para verificação da toxicidade desses inibidores. |
