In‐vitro‐Rekonstitution eines zellulären Phasenübergangs unter Beteiligung der mRNA‐Decapping‐Maschinerie
| Autor: | Remco Sprangers, Ancilla Neu, Julia Kamenz, Erik R. Nöldeke, Simon A. Fromm, Georg Zocher |
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| Rok vydání: | 2014 |
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| Zdroj: | Angewandte Chemie. 126:7482-7487 |
| ISSN: | 1521-3757 0044-8249 |
| DOI: | 10.1002/ange.201402885 |
| Popis: | In eukaryotischen Zellen konnen die Komponenten des 5′-3′-Abbaumechanismus der Boten-RNA (mRNA) einen schnellen Phasenubergang durchlaufen. Die resultierenden zytoplasmatischen Zentren werden Processing Bodys (P-bodys) genannt. Allerdings sind die zugrundeliegenden molekularen Details dieser Selbstaggregation weitgehend unbestimmt. Wir wenden hier eine Bottom-up-Methode an, um zu testen, ob mRNA-Abbaufaktoren Phasenubergange in vitro durchlaufen konnen. Dieser Ansatz umfasst NMR-Spektroskopie, isotherme Titrationskalometrie, Rontgenkristallographie und Fluoreszenzmikroskopie. Wir zeigen, dass das Dcp2-Decapping-Enzym der Spalthefe Schizosaccharomyces pombe, sein Hauptaktivator Dcp1 sowie die Gerustproteine Edc3 und Pdc1 ausreichen, um einen Phasenubergangsprozess einzuleiten. Zwischenmolekulare Wechselwirkungen zwischen der Edc3-LSm-Domane und mindestens zehn helikalen, leucinreichen Motiven in Dcp2 und Pdc1 bilden den Kern des Wechselwirkungsnetzwerks. Wir zeigen, dass die Blockade dieser Wechselwirkungen das Clusteringverhalten in vitro und in vivo behindert. |
| Databáze: | OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
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