| Popis: |
Bu tez çalışması, biyolüminesen Vibrio izolatlarının PHB verimlerinin belirlenmesi üzerinedir. Çalışmamızda kullanmış olduğumuz organizmalar Ege Üniversitesi, Fen Fakültesi, Biyoloji Bölümü, Temel ve Endüstriyel Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı'nda bulunmaktadır. İzmir Körfezi'nden izole edilmiş, saflaştırılmış ve stoklanmıştır.Seçilen organizmaların fenotipik ve genotipik analizleri yapıldıktan sonra PHB üretim kapasiteleri belirlenmiştir. Çalışılmış olan biyoluminesen izolatlardan, PHB inklüzyonlarını belirleyebilmek için elimizdeki saf kültürlerden Sudan Black B ile boyama yapılmıştır. Bunu takiben PHB akümüle ettiği belirlenen türler 16S rRNA sekans analizleri yapıldıktan sonra Vibrio spp. olarak belirlenmişlerdir. PHB üretici kontrol grubu olarak Vibrio harveyi tip straini kullanılmıştır ve suşlar Marine Basal ortamı kullanılarak üretilmişlerdir. Türlerin en iyi PHB verimlerini belirleyebilmek için büyüme eğrileri çıkarılmıştır. Büyüme eğrileri çıkarıldıktan sonra saf PHB'den yararlanılarak spektrofotometrik olarak PHB standartı çıkarılmıştır.Optimum koşullar kullanılarak % 3 gliserol içeren Marine Basal sıvı besiyerinde PHB üretim verimleri araştırılmış ve farklı inkübasyon sürelerinin bu suşların PHB verimi üzerine etkileri belirlenmiştir. Ayrıca glukoz, sükroz ve sodyum asetat gibi farklı karbon kaynakları ve Lserin, L-prolin, yeast ekstrakt ve tripton gibi farklı azot kaynaklarının da PHB verimine etkileri incelenmiştir. Uygun koşullar sağlandığında, tüm karbon ve azot kaynakları içinde en yüksek PHB verimi 36 saat inkübasyondan sonra % 3 gliserol içeren Marine Basal ortamında, moleküler karakterizasyona göre V. harveyi olduğu belirlenen H-15 suşundan % 72, 57 olarak elde edilmiştir. This study is about the research of PHB yield analysis of bioluminescent Vibrio strains. All of the isolates used in this study were obtained from Ege University, Biology Department, which were isolated from Izmir Bay, purified and stocked on suitable medium.Bioluminescent strains were stained with Sudan Black B for determination of PHB inclusions and then suitable isolates were choosen. Afterwards PHB accumulating strains were characterized as Vibrio spp. as determined by 16S rRNA sequencing. Vibrio harveyi LMG 11226 type strain was used as a control group. In order to determine the best yield of PHB, selected strains were grown on Marine Basal Medium and their growth curves were obtained. After that, PHB standard was determined according to pure PHB using spectrophotometric method.In this study, the yield of PHB production has been investigated on Marine Basal Medium with 3 % glycerol and to increase the yield of PHB, different incubation times were studied for each organism. Moreover different carbon sources such as glucose, sucrose and sodium acetate and different nitrogen sources like L-prolin, L-serin, tryptone and yeast extract were also tested. Consequently, among whole different sources, 3 % glycerol containing medium, the best PHB yield were obtained 72, 57 % by Vibrio harveyi H15 strain according to molecular characterization. 127 |
