| Popis: |
ÖZET POLİMERÜC TAŞIYICILARDA DNA İMMOBİLİZASYONU OKUTUCU, Burcu Yüksek Lisans Tezi, Biyokimya Anabilim Dalı Tez yöneticisi: Prof.Dr. Azmi Telefoncu Ağustos 2001, 68 sayfa İnsan genom projesiyle DNA teknolojisi gittikçe önem kazanmaktadır. DNA teknolojisinin uygulama alanları arasında gıda, çevre, adli tıp ve sağlık yanında arkeometri de sayılabilir. DNA biyosensörleri de teknolojik gelişmelere paralel olarak daha kullanılabilir, duyarlılığı ve stabilitesi artırılabilir hale getirilmeye başlanmıştır. Biyosensör yüzeyi farklı tür membranlar ile kaplanarak DNA immobilizasyonu spesifik hale getirilmesiyle, örneğin nokta mutasyonların saptanmasında kullanılabilir. Bu çalışmanın amacı DNA'yı 5'-Fosfat ucundan selüloz asetata bağlamak ve böylece hazırlanan membranlar üzerinde çeşitli modifikasyonlar yaparak biyosensör membranı olarak kullanılabilirliğini optimize etmektir. DNA' nın katı bir desteğe bağlanması, biyoteknoloji ve moleküler biyoloji açısından büyük önem taşır. Çeşitli destek materyalleri ile DNA immobilizasyonu genellikle adsorpsiyon veya kimyasal bağlama yoluyla gerçekleştirilir. Tercih edilen kontrollü ve yönlendirilmiş kovalent bağlamadır. l,r-karbonildiimidazol(CDI) ile aktive edilen selüloz asetatın kuru dioksandaki çözeltisinden çıkılarak farklı kalınlıktamembranlar. hazırlandı. Reaktif selüloz asetat membranlar 1,6-diaminohegzan ile kenetlendi ve böylece membran üzerinde DNA'nın bağlanabileceği uzantılar (spacer arm) oluşturuldu. DNA molekülünün membrana spesifik olarak yalnız S'-ucundan bağlanmasını sağlamak için DNA l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid(EDC) ile 5'-Fosfat grubundan aktive edilidi ve bu grup üzerinden modifiye selüloz asetat membrana kovalent bağlanması gerçekleştirildi. Selüloz asetat modifikasyonu ve DNA immobilizasyonu koşullan optimize edildi. Uzun zincirli bir molekül olan DNA taşıyıcıya yalnız 5'-ucundan bağlanarak ve taşıyıcı membran yüzeyinden uzak tutularak hibridizasyonun etkinleşmesi ve çabuklaşmasına olanak sağlandı. Bu özellik modifiye membran ile DNA biyosensörlerinin hazırlanmasında önemli avantaj sağlamaktadır. Anahtar Sözcükler : Selüloz asetat, Kovalent immobilizasyon, CDI (1,1'Karbonildiimidazol), DNA İmmobilizasyonu vn DNA IMMOBILIZATION ON POLYMERIC SUPPORTS OKUTUCU, Burcu Msc in Biochemistry Supervisor: Prof.Dr.Azmi Telefoncu August 2001, 68 pages DNA technology became very important, after the Human Genome Project (HGP) has been started. The applications of DNA technology can be summarized as; food industry, diagnosis, forensic science, environmental purposes and arkeometry. During last decade, by the development of DNA technology, the studies on DNA biosensors are developped to reach more useful, specific and stabile determination of DNA. Various kinds of membranes can be used to immobilize DNA specifically on biosensor surface for the detection of point mutations. The purpose of this thesis; is the immobilization of DNA on cellulose acetate membrane at 5'- phosphate and the optimization of these membranes (by making modifications) on biosensor surface. Immobilization of DNA on solid support is very important for biotechnology and molecular biology. Many different strategies are used for DNA immobilization such as; adsorption, avidin-biotin complex formation and chemical attachment(covalent, electrochemical and physical). Covalent attachment is the most useful method for immobilization. Cellulose acetate membranes which are prepared in dioxane,are mixed with,l,l'-carbonildiiniidazole(CDI) solution. Following this activation step of cellulose acetate membrane, 1,6 diaminohexane is linked to this membrane as a spacer arm. For the spesific DNA immobilization, DNA is activated from its 5 '-phosphate group by l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide(EDC). Finally covalent attachment of DNA on activated cellulose acetatemembrane is carried out. In order to optimize all conditions various factors were tested. Because of long chains of DNA molecule; specific attachment to membrane from its 5'-phosphate group is very important. By this way DNA is kept only from its 5' terminal and the rest of the molecule react with higher specificities and maintain short hybridization process time. This seems as a big advantage for the preparation of DNA biosensors for diagnostic use- Keywords Cellulose acetate, covalent immobilization,CDI (1,1'Carbonildiimidazole, DNA immobilization 68 |
