Policlonal antiserum specifity against Leifsonia xyli subsp. xyli
| Autor: | Carneiro Jr,Josil B., Silveira,Silvaldo F. da, Souza Filho,Gonçalo A. de, Olivares,Fabio L., Giglioti,Éder A. |
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| Jazyk: | portugalština |
| Rok vydání: | 2004 |
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| Zdroj: | Fitopatologia Brasileira, Volume: 29, Issue: 6, Pages: 614-619, Published: DEC 2004 Fitopatologia Brasileira v.29 n.6 2004 Fitopatologia Brasileira Sociedade Brasileira de Fitopatologia (SBF) instacron:SBF |
| Popis: | Detectar a presença da bactéria Leifsonia xyli subsp. xyli em material de propagação da cana-de-açúcar (Saccharum sp.) é importante para direcionar o controle do raquitismo-da-soqueira. Neste trabalho, objetivou-se produzir anticorpo policlonal específico contra Leifsonia xyli subsp. xyli (Lxx), visando utilizá-lo em método sorológico para detecção do patógeno. Para isso, o antígeno foi preparado a partir de células intactas, após lavagem por centrifugação de cultura-pura em tampão fosfato salino 0,01 M (PBS) e diálise em glutaraldeido 2% em PBS. O plano de imunização em coelho consistiu de duas injeções intramusculares da mistura 1:1 do antígeno com adjuvante Freund (completo e incompleto, a intervalos de 21 dias) e duas injeções subcutâneas do antígeno puro, a intervalos de dez dias. O anti-soro foi testado pelo método de Dot Blot com revelação por peroxidase para se determinar: (i) título do anticorpo e (ii) reação contra Lxx, Xanthomonas axonopodis pv. vesicatoria e bactérias endofíticas de cana-de-açúcar (Azospirillum brasilense, A. lipoferum, Herbaspirillum rubrisubalbicans, H. seropedicae e Gluconacetobacter diazotrophicus). A maior diluição analisada do anti-soro 1:20.000 mostrou reação fortemente positiva e específica contra Lxx e ausência de reação contra as demais bactérias. A purificação da fração IgG (Imunoglobulina G) não resultou em melhoria na reatividade e especificidade do anti-soro. Estimou-se o nível de detecção do método a partir de suspensão bacteriana em 2x10(6) células/ml. To detect the presence of the bacterium Leifsonia xyli subsp. xyli (Lxx) in propagation material is important for the control of the ratoon stunting disease. The objective of this work was to improve a serological method for detection of the pathogen and to evaluate the policlonal antiserum specificity produced against Lxx. The antigen was prepared by resuspending pure culture in PBS and dialyzing it in glutaraldehyde 2% in PBS. The immunization schedule in rabbit constituted of two intramuscularly injections of 1:1 mixture of the antigen: Freund adjuvant (complete and incomplete, with interval of 21 days) and two subcutaneous injections of the antigen, with ten-day intervals. The antiserum was tested by Dot Blot and revealed by peroxidase to determine: (i) title of the antibody, (ii) reaction and specificity against Lxx, Xanthomonas axonopodis pv. vesicatoria and endophytic sugarcane (Saccharum sp.) bacteria (Azospirillum brasilense, A. lipoferum, Hebaspirillum rubrisubalbicans, H. seropedicae, Gluconacetobacter diazotrophicus). The highest dilution of antiserum (1:20.000) presented strong positive reaction and high specificity against Lxx. The purification of the IgG fraction did not improve the antiserum reactivity and specificity. In bacterial cell suspension the level of detection was estimated in 2x10(6) cells/ml. |
| Databáze: | OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
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