| Popis: |
Melanom je najagresivniji tip tumora kože koji najčešće nastaje zbog hiperaktivacije signalnog puta MAPK kao posljedice onkogenih mutacija u nekoj od komponenti toga puta. U oko 60% slučajeva mutacija BRAF p.V600E uzrokuje konstitutivno aktivnu kinazu za koju je razvijen specifičan i efikasan inhibitor vemurafenib. Međutim, u velikom broju pacijenata javlja se otpornost na ovaj lijek već nekoliko mjeseci nakon početka liječenja. Cilj ovog diplomskog rada bio je istražiti ulogu nukleozid-difosfatnih kinazi NME1 i NME2 u regulaciji glavnih signalnih puteva i njihov utjecaj na proliferaciju u svrhu ispitivanja njihovog terapijskog potencijala. Koristeći metode Western blot analize i testa MTT utvrđena je smanjena ekspresija proteina NME u stanicama podlinija otpornih na vemurafenib za koje je uočeno da slabije proliferiraju u odnosu na parentalni soj stanica. Također, utišavanje gena NME komplementarnim siRNA nije utjecalo na proliferaciju stanica, no smanjilo je ekspresiju biljega proliferacije i negativno utjecalo na aktivnost signalnog puta PI3K/AKT. Dobiveni rezultati daju zanimljiv temelj za detaljnija istraživanja usmjerena na koji način proteini NME reguliraju signalni put PI3K/AKT kao i otkrivanje njihovog terapijskog potencijala u liječenju melanoma čovjeka. Melanoma is the most aggressive type of skin tumor that most often occurs due to hyperactivation of the MAPK signaling pathway as a consequence of oncogenic mutations in one of the components of that pathway. In about 60% of cases the presence of BRAF p.V600E mutation results in a constitutively active kinase for which a specific and effective inhibitor, vemurafenib, has been developed. However, several months from the beginning of the treatment the resistance to drug occurs in many melanoma patients. This thesis aimed to investigate the role of nucleoside diphosphate kinases NME1 and NME2 in the regulation of main signaling pathways and their impact on proliferation, with the goal to test their therapeutic potential. Using Western blot analysis and MTT assays we observed reduced expression of NME proteins in vemurafenib-resistant sublines that were shown to have reduced proliferation rate compared to the parental line. In addition, NME silencing with complementary siRNA had no effect on the cell proliferation, however it reduced the expression of a proliferation marker and negatively influenced the activity of the PI3K/AKT signaling pathway. The obtained results provide an interesting basis for more detailed research that is focused on how NME proteins regulate the PI3K/AKT pathway as well as on their therapeutic potential in melanoma treatment. |
