Topologie cellulaire au cours d'un traitement ALA-PDT en microscopie à réflexion totale interne à angle variable (VA-TIRFM)

Autor: Lassalle, Henri-Pierre, Baumann, Harald, Strauss, Wolfgang, Schneckenburger, Herbert
Přispěvatelé: Centre de Recherche en Automatique de Nancy (CRAN), Université Henri Poincaré - Nancy 1 (UHP)-Institut National Polytechnique de Lorraine (INPL)-Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS), Centre Alexis Vautrin (CAV), Hochschule Aalen, Institut für Angewandte Forschung, Hochschule Aalen, Institut für Lasertechnologien in der Medizin und Messtechnik, D'Hallewin, Marie Ange
Jazyk: francouzština
Rok vydání: 2007
Předmět:
Zdroj: 6ème colloque OPTDIAG-Diagnostic et Imagerie Optiques en Médecine
6ème colloque OPTDIAG-Diagnostic et Imagerie Optiques en Médecine, May 2007, Paris, France
Popis: En raison de la faible profondeur de pénétration d'un champ électromagnétique évanescent, la microscopie de fluorescence à réflexion totale interne (TIRFM) s'est avérée être la technique adéquate pour examiner des fluorophores ou des photosensibilisants dans la proximité immédiate de la membrane plasmique de cellules vivantes. En effet, lors d'une légère modification de l'angle d'incidence, la profondeur de pénétration de la lumière évanescente varie, permettant ainsi de calculer la distance cellule-substrat avec une résolution de l'ordre du nanomètre. En utilisant un condenseur spécifique d'illumination TIRFM et une caméra CCD extrêmement sensible à multiplication d'électrons (EMCCD), la fluorescence de la protoporphyrine IX (PP IX) a été étudiée sur des cellules de glioblastomes humains et des cellules HeLa après l'application d'acide 5-aminolévulinique (5-ALA).Une mesure avant et après irradiation à des doses de lumière sub-létales (635 nm; 4 J/cm²) a été réalisée. Pour des cellules en croissance sur des lames de microscope, les distances "cellule-substrat" variaient de 20 nm à 250 nm avec une distance moyenne autour de 120 nm. Après une exposition à la lumière, ces distances sont diminuées, pour atteindre une valeur moyenne de moins de 100 nm. De plus, les contacts focaux - visualisés après transfection de tyrosine-kinase FAK (focal adhesion kinase) marquée grâce à l'EYFP - ont été maintenus, puisque ni l'intensité de fluorescence ni les distances "cellule-substrat" n'ont changé après l'exposition à la lumière. En conclusion, le traitement ALA-PDT réduit les distances "cellule-substrat" et maintient les contacts focaux. Ce travail confirme les résultats d'études antérieures établissant qu'un traitement PDT n'augmente pas le pouvoir métastatique.
Databáze: OpenAIRE
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