Cloning, expression and interaction of human T-cell receptors with the bacterial superantigen SSA

Autor: de Marzi, Mauricio Cesar, Fernández, Marisa Mariel, Sundberg, Eric J., Molinero, Luciana Lorena, Zwirner, Norberto Walter, Llera, Andrea Sabina, Mariuzza, Roy A., Malchiodi, Emilio Luis
Jazyk: angličtina
Rok vydání: 2004
Předmět:
Zdroj: CONICET Digital (CONICET)
Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
instacron:CONICET
DOI: 10.1111/j.1432-1033.2004.04345.x
Popis: Superantigens (SAgs) are a class of disease-causing and immunostimulatory proteins of bacterial or viral origin that activate a large number of T-cells through interaction with the Vβ domain of T-cell receptors (TCRs). In this study, recombinant TCR βchains were constructed with human variable domains Vβ5.2, Vβl and Vβ2.1, expressed as inclusion bodies, refolded and purified. The Streptococcus pyogenes SAg SSA-1 was cloned and expressed as a soluble periplasmic protein. SSA-1 was obtained both as a monomer and a dimer that has an intermolecular disulfide bond. We analyzed the biological activity of the recombinant SAgs by proliferation assays. The results suggest that SSA dimerization occludes the TCR interaction site. Naturally occurring SSA dimerization was also observed in supernatants of S. pyogenes isolates. An SSA mutant [SSA(C26S)] was produced to eliminate the Cys responsible for dimerization. Affinity assays using a resonant biosensor showed that both the mutant and monomeric wild type SSA have affinity for human Vβ5.2 and Vβ1 with Kd of 9-11 μM with a fast kass and a moderately fast kdiss. In spite of the reported stimulation of Vβ2.1 bearing T-cells by SSA, we observed no measurable interaction. Fil: de Marzi, Mauricio Cesar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentina Fil: Fernández, Marisa Mariel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentina Fil: Sundberg, Eric J.. University Of Maryland. Biotechnology Institute; Estados Unidos Fil: Molinero, Luciana Lorena. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín. Laboratorio de Inmunogenética; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Zwirner, Norberto Walter. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín. Laboratorio de Inmunogenética; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Llera, Andrea Sabina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentina Fil: Mariuzza, Roy A.. University Of Maryland. Biotechnology Institute; Estados Unidos Fil: Malchiodi, Emilio Luis. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentina
Databáze: OpenAIRE
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