| Popis: |
S-adenozilhomocistein-hidrolaza (SAHH) katalizira hidrolizu S-adenozilhomocisteina (SAH), koji je produkt a ujedno i inhibitor S-adenozilmetionin (SAM)-ovisnih metiltransferaza. Kod normalnih fizioloških uvjeta, SAH se hidrolizira u adenozin i homocistein. Prethodna istraživanja su pokazala da inhibicija ili deficijencija SAHH uzrokuje smanjenje omjera SAM/SAH rezultirajući u smanjenoj transmetilaciji, dok efekt povećane aktivnosti SAHH na metabolizam SAM/SAH i reakcije metilacije još nije bio proučavan. Stoga, glavni cilj našeg istraživanja je bilo stvaranje modelnog sistema za proučavanje promjena uzrokovanih prekomjernom ekspresijom SAHH. Prekloniranjem cDNA SAHH iz vektora p32SAHHwt u ekspresijski vektor pcDNA3, kreirali smo konstrukt pcDNA3SAHHwt koji je bio prikladan za stabilno transficiranje stanica u kulturi. Konstruirani vektor je elekroporiran u HeLa stanice (stanice raka grlića maternice). Nakon selekcije stabilnih transfektanata koristeći otpornost na neomicin, mjerena je aktivnost SAHH i analizirana ekspresija gel-elektroforezom i imunodetekcijom. Rezultati su pokazali da je moguće stanice HeLa transficirati sa vektorom pcDNA3SAHHwt te načiniti stabilno transficirane stanice otporne na antibiotik neomicin. Unatoč uspješnoj transfekciji prekomjerna ekspresija gena za SAHH u neomicin otpornim stanicama HeLa nije uočena. |
