| Popis: |
Kronična opstrukcijska plućna bolest (KOPB) jedan je od vodećih uzroka smrti u svijetu. U ovoj bolesti dolazi do progresivnog ograničenja protoka zraka povezanog s pojačanim kroničnim upalnim odgovorom u dišnim putovima i plućima na štetne čestice ili plinove, a osim plućnih manifestacija, postoji i sistemska komponenta KOPB-a koja je karakterizirana kroničnom upalom, oksidacijskim stresom, aktivacijom imunosnih stanica i povišenom koncentracijom upalnih citokina u krvi. S patogenezom KOPB-a povezuju se različiti oblici stanične smrti kao što su nekroptoza i piroptoza, a od štetnih čestica značajnu ulogu imaju DAMP i PAMP molekule koje vezanjem na receptore potiču upalni odgovor. U provedenom istraživanju na NCI- H292 bronhijalnim epitelnim stanicama i THP-1 monocitima, od kojih prve predstavljaju plućnu, a druge sistemsku komponentu KOPB-a, ispitivano je djelovanje rhHsp70 (0, 3, 1 i 3 μg/mL), bakterijskih komponenti LPS-a (0, 1 µg/mL) i LTA (1 µg/mL) te njihovih kombinacija tijekom 24- satnog tretiranja, s ciljem utvrđivanja dolazi li, i u kojim koncentracijama ovih agenasa, do aktivacije NLRP3 inflamasoma, nekroptoze i piroptoze. Aktivacija NLRP3 inflamasoma i upalni odgovor ispitani su određivanjem ekspresije mRNA za NLRP3, kaspazu-1 i upalni citokin IL-1β kvantitativnim PCR-om. Vijabilnost stanica ispitana je određivanjem aktivnosti LDH izlučene u medij iznad stanica, a njihov način umiranja ispitan je određivanjem ekspresije mRNA za kaspazu-1, aktivacije proteina RIPK1 i MLKL te ekspresije proteina gasdermina D Western blot analizom. Dokazano je da do pojačane ekspresije mRNA za NLRP3, kaspazu-1 i IL-1ß u NCI-H292 i THP- 1 stanicama dovode pojedinačna tretiranja s rhHsp70, LPS-om i LTA-om što ukazuje na aktivaciju NLRP3 inflamasoma i upalu. Katalitičku aktivnost LDH u mediju iznad THP-1 stanica povećavaju sva primijenjena tretiranja, pojedinačna i kombinirana, a u mediju iznad NCI-H292 stanica samo pojedinačna tretiranja s rhHsp70, LPS-om i LTA-om što znači da je narušen integritet stanične membrane i da je aktiviran neki oblik stanične smrti. Povećana ekspresija mRNA za IL-1ß i kaspazu-1 te povećana ekspresija proteina gasdermina D u NCI-H292 i THP-1 stanicama ukazuju na aktivnost piroptoze, dok nekroptoza u ovim stanicama nije aktivna jer niti jedno upotrijebljeno tretiranje nije dovelo do aktivacije RIPK1 i MLKL-a, iako su ove molekule eksprimirane u tim stanicama. Određene kombinacije rhHsp70 s LPS-om i LTA-om pokazuju zaštitno djelovanje na NCI-H292 i THP-1 stanice (povećavaju vijabilnost). Možemo zaključiti da sam eHsp70 potiče razvoj upale putem NLRP3 inflamasoma i stanično umiranje, ali potiskuje te procese u kombinacijama s bakterijskim produktima. Tijekom akutnih egzacerbacija u bolesnika s kroničnom opstrukcijskom plućnom bolesti izazvanim bakterijskim infekcijama, eHsp70 bi mogao imati povoljan učinak. |
