| Popis: |
Vemurafenib je selektivni inhibitor mutiranog proteina BRAF V600E koji se javlja u 60% melanoma. Unatoč početnim obećavajućim rezultatima, ubrzo nakon liječenja vemurafenibom dolazi do pojave stečene otpornosti stanica melanoma na ovaj lijek. Stečena otpornost često je posljedica reaktivacije signalnog puta MAPK (engl. mitogen activated protein kinase) ili aktivacije alternativnog signalnog puta PI3K/AKT (engl. phosphoinositide-3- kinase/Akt). U mnogim je tumorima, uključujući melanom, uočena smanjena ekspresija gena ITIH5. Unatoč tome, njegova uloga u stečenoj otpornosti stanica melanoma na vemurafenib još nije istražena. Cilj ovog diplomskog rada bio je istražiti učinak utišavanja ovoga gena na otpornost na vemurafenib, na signalne puteve MAPK i PI3K/AKT te na proliferaciju staničnih linija melanoma čovjeka WM793B i A375M. Utišavanje gena ITIH5 provedeno je prolaznom transfekcijom stanica malim interferirajućim RNA koje ciljaju ITIH5 koristeći kalcijev fosfat. Provjera ekspresije i uspješnosti utišavanja provedena je kvantitativnom polimeraznom lančanom reakcijom (qPCR). Nakon utišavanja ITIH5 provjerena je vijabilnost i proliferacija stanica metodom MTT te razina biljega aktivnosti istraživanih signalnih puteva i proliferacije metodom Western blot. Navedene su analize pokazale da tretman vemurafenibom znatno snižava ekspresiju gena ITIH5 te da snižena ekspresija ITIH5 povećava proliferaciju u navedenim staničnim linijama melanoma čovjeka. |
