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Crude enzyme extract containing polyphenoloxidase (PPO) was obtained from ripe soursop (Annona muricata L.) fruit by extraction with 0.2 M phosphate buffer (pH 7.5) containing 0.5 M NaCl, followed by precipitation with 20, 40, 60 and 80% saturation of ammonium sulfate and dialysis against distilled water at 4°C. The maximum PPO activity was observed in the protein fraction obtained with 60% ammonium sulphate saturation. The effect of pH (3 to 8.8), temperature (20 to 60°C) and chemical inhibitors (ascorbic acid, EDTA and SO2) at several concentrations on the PPO activity was studied. The optimum pH and temperature for PPO activity were 7.5 and 32°C, respectively. Among chemical inhibitors, ascorbic acid and SO2 were almost equally effective, but EDTA showed very small inhibitory effect. 61.9 and 71.5% inhibition of PPO was achieved using 0.28 mM and 0.84 mM concentrations of ascorbic acid, while for 55.4 and 70.2% inhibition 0.78 mM and 2.34 mM concentrations of SO2 were needed. Heating the enzyme extract at 70, 80, 90 and 95°C for 6 s reduced 15.2, 49.5, 84.8 and 95.1% PPO activity, respectively. At the natural pH of pulp (4.3), SO2 at concentration of 3.9 mM reduced specific activity of PPO from about 60 to about 8.4 U/mg protein in partially-purified enzyme extract (PPEE), while the specific activity of 22.5 U/mg protein was retained in the pulp. Heating PPEE at 80°C at pH 4.3 (natural pH of pulp) for about 14 s decreased specific enzyme activity from 60.0 to about 11.0 U/mg and heating during 8 min decreased to 9.0 U/mg protein. © 2004 Altaga. All rights reserved. Resumen Se obtuvo un extracto crudo de enzima conteniendo polifenoloxidasas (PPO) de frutos maduros de Guanábana (Annona muricata L.) por extracción con 0,2 M tampón fosfato (pH 7,5) conteniendo 0,5 M NaCl, seguido de precipitación con 20, 40, 60 y 80% de saturación de sulfato amónico y diálisis con agua destilada a 4°C. El máximo de actividad de PPO se observó en la fracción de proteína obtenida con 60% de saturación sulfato amónico. Se estudió el efecto del pH (3 a 8,8), temperatura (20 a 60°C) y inhibidores químicos (ácido ascórbico, EDTA y SO2) a varias concentraciones, sobre la actividad de PPO. Los óptimos de pH y temperatura para la actividad de PPO fueron 7,5 y 32°C, respectivamente. Mientras que para los inhibidores químicos, ácido ascórbico y SO2 fueron casi igual de efectivos, pero EDTA mostró un bajo efecto inhibidor. Se obtuvo un 61,9 y 71,5% de inhibición de PPO con 0,28 mM y 0,84 mM de concentración de ácido ascórbico, mientras que con 0,78 mM y 2,34 mM de concentración de SO2 obtuvo un 55,4 y 70,2% de inhibición, respectivamente. Calentando el extracto enzimático a 70, 80, 90 y 95°C durante 6 s, se redujo a 15,2, 49,5, 84,8 y 95,1% la actividad de PPO, respectivamente. Al pH natural de la pulpa (4,3), SO2 a la concentración del extracto enzimático 3,9 mM redujo la actividad específica de PPO desde 60 a 8,4 U/mg proteína en extracto enzimático parcialmente purificado (PPEE), mientras que en la pulpa la actividad específica se retuvieron 22,5 U/mg de proteína. Calentando PPEE a 80°C a pH 4,3 (ph natural de la pulpa) por 14 s se redujo la actividad enzimática específica de 60,0 a 11,0 U/mg y calentando 8 min a 9,0 U/mg de proteina.© 2004 Altaga. Todos los derechos reservados. Palabras clave: Guanábana, Annona muricata, Polifenoxidasa, Inhibición enzimática Resumo Obtívose un extracto cru de enzima contendo polifenoloxidasas (PPO) de froitos maduros de Guanábana (Annona muricata L.) por extracción con 0,2 M tampón fosfato (pH 7,5) contendo 0,5 M NaCl, seguido de precipitación con 20, 40, 60 y 80% de saturación de sulfato amónico e diálise con auga destilada a 4°C. O máximo de actividade de PPO observouse na fracción de proteína obtida con 60% de saturación sulfato amónico. Estudiouse o efecto do pH (3 a 8,8), temperatura (20 a 60°C) e inhibidores químicos (ácido ascórbico, EDTA e SO2) a varias concentracións, sobre a actividade de PPO. Os óptimos de pH e temperatura para a actividade de PPO foron 7,5 e 32°C, respectivamente. Mentras que para os inhibidores químicos, ácido ascórbico y SO2 foron case igual de efectivos, pero EDTA mostrou un baixo efecto inhibidor. Obtívose un 61,9 e 71,5% de inhibición de PPO con 0,28 mM e 0,84 mM de concentración de ácido ascórbico, mentras que con 0,78 mM e 2,34 mM de concentración de SO2 se obtivo un 55,4 e 70,2% de inhibición, respectivamente. Quentando o extracto enzimático a 70, 80, 90 e 95°C durante 6 s, reduciuse a 15,2, 49,5, 84,8 e 95,1% a actividade de PPO, respectivamente. O pH natural da pulpa (4,3), SO2 á concentración do extracto enzimático 3,9 mM reduciu a actividade específica de PPO dende 60 a 8,4 U/mg de proteína en extracto enzimático parcialmente purificado (PPEE), mentras que na polpa a actividade específica retivéronse 22,5 U/mg de proteína. Quentando PPEE a 80°C a pH 4,3 (pH natural de la polpa) por 14 s reduciuse a actividade enzimática específica de 60,0 a 11,0 U/mg e quentando 8 min a 9,0 U/mg de proteina. © 2004 Altaga. Tódolos dereitos reservados. Palabras chave: Guanábana, Annona muricata, Polifenoloxidasa, Inhibición enzimática [ABSTRACT FROM PUBLISHER] |
