Design of Affinity Chromatography Peptide Ligands Through Combinatorial Peptide Library Screening.

Autor: Barredo GR; Cátedra de Biotecnología. Facultad de Farmacia y Bioquímica,, Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina.; Instituto de Nanobiotecnología (NANOBIOTEC). Facultad de Farmacia y Bioquímica., CONICET-Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina., Saavedra SL; Cátedra de Biotecnología. Facultad de Farmacia y Bioquímica,, Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina.; Instituto de Nanobiotecnología (NANOBIOTEC). Facultad de Farmacia y Bioquímica., CONICET-Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina., Martínez-Ceron MC; Cátedra de Biotecnología. Facultad de Farmacia y Bioquímica,, Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina.; Instituto de Nanobiotecnología (NANOBIOTEC). Facultad de Farmacia y Bioquímica., CONICET-Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina., Giudicessi SL; Cátedra de Biotecnología. Facultad de Farmacia y Bioquímica,, Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina.; Instituto de Nanobiotecnología (NANOBIOTEC). Facultad de Farmacia y Bioquímica., CONICET-Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina., Marani MM; Instituto Patagónico para el Estudio de Ecosistemas Continentales (IPEEC), CONICET, Puerto Madryn, Chubut, Argentina., Albericio F; Peptide Science Laboratory, School of Chemistry and Physics, University of KwaZulu-Natal, Durban, South Africa.; CIBER-BBN, Networking Centre on Bioengineering, Biomaterials & Nanomedicine, Department of Organic Chemistry, University of Barcelona, Barcelona, Spain., Cascone O; Cátedra de Biotecnología. Facultad de Farmacia y Bioquímica,, Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina.; Instituto de Nanobiotecnología (NANOBIOTEC). Facultad de Farmacia y Bioquímica., CONICET-Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina., Camperi SA; Cátedra de Biotecnología. Facultad de Farmacia y Bioquímica,, Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina. scamperi@ffyb.uba.ar.; Instituto de Nanobiotecnología (NANOBIOTEC). Facultad de Farmacia y Bioquímica., CONICET-Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina. scamperi@ffyb.uba.ar.
Jazyk: angličtina
Zdroj: Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) [Methods Mol Biol] 2021; Vol. 2178, pp. 217-243.
DOI: 10.1007/978-1-0716-0775-6_16
Abstrakt: In this chapter, a protocol to design affinity chromatography matrices with short peptide ligands immobilized for protein purification is described. The first step consists of the synthesis of a combinatorial peptide library on the hydroxymethylbenzoyl (HMBA)-ChemMatrix resin by the divide-couple-recombine (DCR) method using the Fmoc chemistry. Next, the library is screened with the protein of interest labeled with a fluorescent dye or biotin. Subsequently, peptides contained on positive beads are identified by tandem matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS/MS), and those sequences showing greater consensus are synthesized in larger quantities and immobilized on chromatographic supports. Finally, target protein adsorption on peptide affinity matrices is evaluated through equilibrium adsorption isotherms and breakthrough curves.
Databáze: MEDLINE
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