Highly efficient production of rabies virus glycoprotein G ectodomain in Sf9 insect cells.

Autor: Targovnik AM; 1Cátedra de Biotecnología, Departamento de Microbiología, Inmunología, Biotecnología y Genética, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires, Junín 956, Sexto Piso, C1113AAD Buenos Aires, Argentina.; 2Instituto de Nanobiotecnología (NANOBIOTEC), CONICET-Universidad de Buenos Aires, Junín 956, Sexto Piso, C1113AAD Buenos Aires, Argentina., Ferrari A; 3Instituto de Química y Físico-Química Biológicas 'Prof. Alejandro C. Paladini' (CONICET-Universidad de Buenos Aires), Buenos Aires, Argentina., Mc Callum GJ; 1Cátedra de Biotecnología, Departamento de Microbiología, Inmunología, Biotecnología y Genética, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires, Junín 956, Sexto Piso, C1113AAD Buenos Aires, Argentina.; 2Instituto de Nanobiotecnología (NANOBIOTEC), CONICET-Universidad de Buenos Aires, Junín 956, Sexto Piso, C1113AAD Buenos Aires, Argentina., Arregui MB; 1Cátedra de Biotecnología, Departamento de Microbiología, Inmunología, Biotecnología y Genética, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires, Junín 956, Sexto Piso, C1113AAD Buenos Aires, Argentina.; 2Instituto de Nanobiotecnología (NANOBIOTEC), CONICET-Universidad de Buenos Aires, Junín 956, Sexto Piso, C1113AAD Buenos Aires, Argentina., Smith I; 1Cátedra de Biotecnología, Departamento de Microbiología, Inmunología, Biotecnología y Genética, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires, Junín 956, Sexto Piso, C1113AAD Buenos Aires, Argentina.; 2Instituto de Nanobiotecnología (NANOBIOTEC), CONICET-Universidad de Buenos Aires, Junín 956, Sexto Piso, C1113AAD Buenos Aires, Argentina., Bracco LF; 1Cátedra de Biotecnología, Departamento de Microbiología, Inmunología, Biotecnología y Genética, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires, Junín 956, Sexto Piso, C1113AAD Buenos Aires, Argentina.; 2Instituto de Nanobiotecnología (NANOBIOTEC), CONICET-Universidad de Buenos Aires, Junín 956, Sexto Piso, C1113AAD Buenos Aires, Argentina., Alfonso V; 4Instituto de Biotecnología, Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA), Buenos Aires, Argentina.; 5Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET), Buenos Aires, Argentina., López MG; 4Instituto de Biotecnología, Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA), Buenos Aires, Argentina.; 5Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET), Buenos Aires, Argentina., Martínez-Solís M; 6Department of Genetics and Estructura de Recerca Interdisciplinar en Biotecnologia i Biomedicina (ERI-BIOTECMED), Universitat de València, Dr. Moliner 50, 46100 Burjassot, Valencia, Spain., Herrero S; 6Department of Genetics and Estructura de Recerca Interdisciplinar en Biotecnologia i Biomedicina (ERI-BIOTECMED), Universitat de València, Dr. Moliner 50, 46100 Burjassot, Valencia, Spain., Miranda MV; 1Cátedra de Biotecnología, Departamento de Microbiología, Inmunología, Biotecnología y Genética, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires, Junín 956, Sexto Piso, C1113AAD Buenos Aires, Argentina.; 2Instituto de Nanobiotecnología (NANOBIOTEC), CONICET-Universidad de Buenos Aires, Junín 956, Sexto Piso, C1113AAD Buenos Aires, Argentina.
Jazyk: angličtina
Zdroj: 3 Biotech [3 Biotech] 2019 Nov; Vol. 9 (11), pp. 385. Date of Electronic Publication: 2019 Oct 04.
DOI: 10.1007/s13205-019-1920-4
Abstrakt: In the present study, we developed a complete process to produce in insect cells a high amount of the ectodomain of rabies virus glycoprotein G (G E ) as suitable antigen for detecting anti-rabies antibodies. Using the baculovirus expression vector system in Sf9 insect cells combined with a novel chimeric promoter ( polh - pSeL ), the expression level reached a yield of 4.1 ± 0.3 mg/L culture, which was significantly higher than that achieved with the standard polh promoter alone. The protein was recovered from the cell lysates and easily purified in only one step by metal ion affinity chromatography, with a yield of 95% and a purity of 87%. Finally, G E was successfully used in an assay to detect specific antibodies in serum samples derived from rabies-vaccinated animals. The efficient strategy developed in this work is an interesting method to produce high amounts of this glycoprotein.
Competing Interests: Conflict of interestThe authors declare that they have no conflict of interest in the publication.
(© King Abdulaziz City for Science and Technology 2019.)
Databáze: MEDLINE
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