An anti-amoebic vaccine: generation of the recombinant antigen LC3 from Entamoeba histolytica linked to mutated exotoxin A (PEΔIII) via the Pichia pastoris system.

Autor: Martínez-Hernández SL; Departamento de Morfología, Centro de Ciencias Básicas, Universidad Autónoma de Aguascalientes, Av. Universidad # 940, Ciudad Universitaria, C. P. 20131, Aguascalientes, AGS, Mexico., Cervantes-García D; CONACYT-Departamento de Microbiología, Centro de Ciencias Básicas, Universidad Autónoma de Aguascalientes, Aguascalientes, AGS, Mexico., Muñoz-Ortega M; Departamento de Química, Centro de Ciencias Básicas, Universidad Autónoma de Aguascalientes, Aguascalientes, AGS, Mexico., Aldaba-Muruato LR; Departamento de Morfología, Centro de Ciencias Básicas, Universidad Autónoma de Aguascalientes, Av. Universidad # 940, Ciudad Universitaria, C. P. 20131, Aguascalientes, AGS, Mexico., Loera-Muro VM; Departamento de Fisiología y Farmacología, Centro de Ciencias Básicas, Universidad Autónoma de Aguascalientes, Aguascalientes, AGS, Mexico., Ascacio-Martínez JA; Departamento de Bioquímica y Medicina Molecular, Centro de Investigación y Desarrollo en Ciencias de la Salud y, Universidad Autónoma de Nuevo León, Monterrey, NL, Mexico., de Jesús Loera-Arias M; Departamento de Histología, Facultad de Medicina, Universidad Autónoma de Nuevo León, Monterrey, NL, Mexico., de Oca-Luna RM; Departamento de Histología, Facultad de Medicina, Universidad Autónoma de Nuevo León, Monterrey, NL, Mexico., Ventura-Juárez J; Departamento de Morfología, Centro de Ciencias Básicas, Universidad Autónoma de Aguascalientes, Av. Universidad # 940, Ciudad Universitaria, C. P. 20131, Aguascalientes, AGS, Mexico. jventur@correo.uaa.mx.
Jazyk: angličtina
Zdroj: Biotechnology letters [Biotechnol Lett] 2017 Aug; Vol. 39 (8), pp. 1149-1157. Date of Electronic Publication: 2017 May 03.
DOI: 10.1007/s10529-017-2341-2
Abstrakt: Objective: To generate an immunogenic chimeric protein containing the Entamoeba histolytica LC3 fragment fused to the retrograde delivery domains of exotoxin A of Pseudomonas aeruginosa and KDEL3 for use as an effective vaccine.
Results: A codon-optimized synthetic gene encoding the PEΔIII-LC3-KDEL3 fusion construct was designed for expression in Pichia pastoris. This transgene was subcloned into the plasmid pPIC9 for methanol-inducible expression. After transformation and selection of positive-transformed clones by PCR, the expression of the recombinant protein PEΔIII-LC3-KDEL3 was elicited. SDS-PAGE, protein glycosylation staining and western blot assays demonstrated a 67 kDa protein in the medium culture supernatant. The recombinant protein was detected with a polyclonal anti-6X His tag antibody and a polyclonal E. histolytica-specific antibody. A specific antibody response was induced in hamsters after immunization with this protein.
Conclusions: We report for the first time the design and expression of the recombinant E. histolytica LC3 protein fused to PEΔIII and KDEL3, with potential application as an immunogen.
Databáze: MEDLINE
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