Isolation, structural and functional characterization of a new Lys49 phospholipase A2 homologue from Bothrops neuwiedi urutu with bactericidal potential.

Autor: Corrêa EA; Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde, CEBio, Fundação Oswaldo Cruz, FIOCRUZ, Fiocruz Rondônia, and Departamento de Medicina, Universidade Federal de Rondônia, UNIR, Porto Velho-RO, Brazil; Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia de Rondônia, IFRO, Porto Velho-RO, Brazil; Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnologia da Rede BIONORTE, Brazil., Kayano AM; Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde, CEBio, Fundação Oswaldo Cruz, FIOCRUZ, Fiocruz Rondônia, and Departamento de Medicina, Universidade Federal de Rondônia, UNIR, Porto Velho-RO, Brazil., Diniz-Sousa R; Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde, CEBio, Fundação Oswaldo Cruz, FIOCRUZ, Fiocruz Rondônia, and Departamento de Medicina, Universidade Federal de Rondônia, UNIR, Porto Velho-RO, Brazil., Setúbal SS; Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde, Fundação Oswaldo Cruz, FIOCRUZ, Fiocruz Rondônia, Porto Velho-RO, Brazil., Zanchi FB; Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde, CEBio, Fundação Oswaldo Cruz, FIOCRUZ, Fiocruz Rondônia, and Departamento de Medicina, Universidade Federal de Rondônia, UNIR, Porto Velho-RO, Brazil; Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnologia da Rede BIONORTE, Brazil., Zuliani JP; Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnologia da Rede BIONORTE, Brazil; Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde, Fundação Oswaldo Cruz, FIOCRUZ, Fiocruz Rondônia, Porto Velho-RO, Brazil., Matos NB; Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnologia da Rede BIONORTE, Brazil; Centro de Pesquisa em Medicina Tropical de Rondônia, CEPEM, and Fundação Oswaldo Cruz, FIOCRUZ, Fiocruz Rondônia, Porto Velho-RO, Brazil., Almeida JR; Departamento de Bioquímica, Universidade Estadual de Campinas, UNICAMP, Campinas-SP, Brazil., Resende LM; Departamento de Bioquímica, Universidade Estadual de Campinas, UNICAMP, Campinas-SP, Brazil., Marangoni S; Departamento de Bioquímica, Universidade Estadual de Campinas, UNICAMP, Campinas-SP, Brazil., da Silva SL; Universidade Regional Amazónica IKIAM, Via Muyuna Km 7, Tena, Napo, Ecuador., Soares AM; Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde, CEBio, Fundação Oswaldo Cruz, FIOCRUZ, Fiocruz Rondônia, and Departamento de Medicina, Universidade Federal de Rondônia, UNIR, Porto Velho-RO, Brazil; Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnologia da Rede BIONORTE, Brazil; Faculdade São Lucas, FSL, Porto Velho-RO, Brazil. Electronic address: andreimar@fiocruz.br., Calderon LA; Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde, CEBio, Fundação Oswaldo Cruz, FIOCRUZ, Fiocruz Rondônia, and Departamento de Medicina, Universidade Federal de Rondônia, UNIR, Porto Velho-RO, Brazil; Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnologia da Rede BIONORTE, Brazil.
Jazyk: angličtina
Zdroj: Toxicon : official journal of the International Society on Toxinology [Toxicon] 2016 Jun 01; Vol. 115, pp. 13-21. Date of Electronic Publication: 2016 Feb 27.
DOI: 10.1016/j.toxicon.2016.02.021
Abstrakt: Snake venom is a complex mixture of active compounds consisting of 80-90% proteins and peptides that exhibit a variety of biological actions that are not completely clarified or identified. Of these, phospholipase A2 is one of the molecules that has shown great biotechnological potential. The objectives of this study were to isolate, biochemically and biologically characterize a Lys49 phospholipase A2 homologue from the venom of Bothrops neuwiedi urutu. The protein was purified after two chromatographic steps, anion exchange and reverse phase. The purity and relative molecular mass were assessed by SDS-PAGE, observing a molecular weight typical of PLA2s, subsequently confirmed by mass spectrometry obtaining a mass of 13,733 Da. As for phospholipase activity, the PLA2 proved to be enzymatically inactive. The analyses by Edman degradation and sequencing of the peptide fragments allowed for the identification of 108 amino acid residues; this sequence showed high identity with other phospholipases A2 from Bothrops snake venoms, and identified this molecule as a novel PLA2 isoform from B. neuwiedi urutu venom, called BnuTX-I. In murine models, both BnuTX-I as well as the venom induced edema and myotoxic responses. The cytotoxic effect of BnuTX-I in murine macrophages was observed at concentrations above 12 μg/mL. BnuTX-I also presented antimicrobial activity against gram-positive and negative bacterial strains, having the greatest inhibitory effect on Pseudomonas aeruginosa. The results allowed for the identification of a new myotoxin isoform with PLA2 structure with promising biotechnological applications.
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Databáze: MEDLINE
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