Criopreservação de sementes de orquídeas brasileiras

Autor: Edilene Aparecida Preti Ferrari
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2016
Zdroj: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UELUniversidade Estadual de LondrinaUEL.
Druh dokumentu: Doctoral Thesis
Popis: A criopreservação é o método de conservação em que o material biológico é submetido à temperaturas extremamente baixas utilizando nitrogênio líquido (- 196ºC) ou em sua fase de vapor (-150ºC), possibilitando a conservação de germoplasmas de interesse ou em risco de extinção, em um espaço relativamente pequeno. Para espécies de Orchidaceae, tem-se utilizado sementes, protocormos e suspensão de células. Na criopreservação é necessário a utilização de soluções que preservem a integridade da membrana e evite a formação dos cristais de gelo no interior das células. Essas soluções crioprotetoras são substâncias químicas que possuem ou não a habilidade de penetrar as membranas celulares. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da umidade e soluções crioprotetoras na criopreservação de sementes de orquídeas brasileiras do gênero Cattleya e Miltonia.No primeiro experimento, as sementes foram imersas em soluções crioprotetoras e de vitrificação e após em nitrogênio líquido (NL) (-196 ºC), com os tratamentos: T1 - controle; T2 - glicerol 2M (20 min); T3 - sacarose 0,4M (20 min); T4 - glicerol 2M (20 min) + sacarose 0,4M (20 min); T5 - glicerol 2M (20 min) + PVS2 (10 min); T6 - glicerol 2M (20 min) + PVS2 +floroglucinol a 1% (10 min); T7 - sacarose 0,4M (20 min) + PVS2 (10 min); T8 - sacarose 0,4M (20 min) + PVS2 +floroglucinol a 1% (10 min); T9 - glicerol 2M (20 min) + sacarose 0,4M (20 min) + PVS2 (10 min); T10 - glicerol 2M (20 min) + sacarose 0,4M (20 min) + PVS2 + floroglucinola 1% (10 min). No segundo experimento, as sementes das orquídeasCattleyalabiataLindl. eMiltoniaregnelliRchb.f. foram submetidas ao processo de secagem em estufa ou aumento da umidade em recipiente de vidro hermético até alcançarem os graus de umidade estabelecidos para compor os seis tratamentos (4, 6, 8, 10, 12 e 15 %) e criopreservadas a -196ºC durante 24 horas e, em seguida, descongeladas e analisadas. Em ambos os experimentos foram avaliadas a porcentagem de sementes viáveis, porcentagem de protocormos provenientes de sementes criopreservadas que se mantiveram vivos após 150 dias do subcultivo, massa fresca e seca de plântulas e número de brotos. Os dados foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e as médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de signeficância.Este estudo demonstrou que é possível criopreservar sementes de CattleyalabiataLindl. e MiltoniaregnelliRchb.f. diretamente em nitrogênio líquido (-196°C) sem a necessidade de pré-tratamento com soluções crioproteotras sendo que o grau ideal de umidade para obtenção de maior percentual de sementes viáveis é de 4%.
Cryopreservation is the conservation method in which the biological material is submitted to extremely low temperatures using liquid nitrogen (-196°C) or its vapor phase (-150 ºC), enabling the conservation of germplasm of interest or endangered, in a relatively small space. To species of Orchidaceae, we have used seed, and protocorm cell suspension.In cryopreservation it is necessary the use of solutions that preserve the integrity of the membrane and avoid the formation of ice crystals within the cells. These cryoprotectant solutions are chemicals substances that have or not the ability to penetrate cell membranes. The purpose of this study was to evaluate the influence of moisture and cryoprotectant solutions in cryopreservation of Brazilian orchids seeds from Cattleya and Miltonia gender. In the first experiment, the treatments consisted of immerging the seeds in cryoprotectant solutions and vitrification before immersion in liquid nitrogen (NL) (-196 ° C), according to the following treatments: T1 - control; T2 - glycerol 2M (20 min); T3 - saccharose 0.4M (20 min); T4 - glycerol 2M (20 min) + saccharose 0.4 M (20 min); T5 - glycerol 2M (20 min) + PVS2 (10 min); T6 - glycerol 2M (20 min) + PVS2 with phloroglucinol at 1% (10 min); T7 - saccharose 0.4 M (20 min) + PVS2 (10 min); T8 - saccharose 0.4M (20 min) + PVS2 with phloroglucinol at 1% (10 min); T9 - glycerol 2M (20 min) + saccharose 0.4 M (20 min) + PVS2 (10 min); T10 - glycerol 2M (20 min) + saccharose 0.4 M (20 min) + PVS2 with 1% phloroglucinol (10 min). In the second experiment, the Cattleya labiata Lindl. and Miltonia regnelli Rchb.f. orchids seeds were submitted to the drying process in oven or increased humidity in airtight glass container, until they reach the moisture established to compose the six treatments (4, 6, 8, 10, 12 and 15%) and cryopreserved at -196 ° C for 24 hours and then thawed and analyzed. In both experiments, the viable seeds percentages were evaluated, percentage of protocorms derived from cryopreserved seeds that remained alive after 150 days of subculture, fresh and dry mass seedlings and number of sprouts. The data were submitted to analysis of variance (ANOVA) and average compared by the test of Tukey at 5%. This study demonstrates that it is possible cryopreservation of Cattleya labiata Lindl. and Miltonia regnelli Rchb.f. seeds directly in liquid nitrogen (- 196 ° C) without the need of pretreatment with cryoprotectant solutions being that the optimum moisture content for obtaining a greater percentage of viable seeds is 4%.
Databáze: Networked Digital Library of Theses & Dissertations
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