Avaliação do efeito dos óleos essenciais de Ocimum Gratissimum e Mentha x Villosa em linhagem de células de adenocarcinoma humano de pulmão: citotoxicidade, ciclo celular e produção de TGF- β1

Autor: Oliveira, Erick Esteves de
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2015
Předmět:
Zdroj: Repositório Institucional da UFJFUniversidade Federal de Juiz de ForaUFJF.
Druh dokumentu: masterThesis
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CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico
FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais
Ocimum. gratissimum L. e Mentha x villosa Huds. são duas plantas aromáticas que são amplamente utilizadas no Brasil e em outros países tanto para fins terapêuticos, como na culinária. Diversas atividades farmacológicas já foram descritas para essas duas plantas e para os componentes majoritários de seus óleos essenciais, Eugenol e Óxido de Piperitenona, respectivamente. Porém ainda há a carência de estudos sobre a atividade antiproliferativa desses óleos essenciais sobre linhagens tumorais e as implicações desses compostos sobre a produção de TGF-1, uma citocina que, em tumores já estabelecidos, apresenta efeito pró-tumoral. Esse estudo visa avaliar os efeitos dos tratamentos com os óleos essenciais de O. gratissimum e M. x villosa, sobre uma linhagem de adenocarcinoma humano de pulmão produtora de TGF-1. Métodos: A viabilidade celular foi avaliada através do ensaio de MTT em linhagens de células (A549 e J774 A.1) e em macrófagos intraperitoneais tratados com 5 a 200g/mL, por 48h. O efeito dos óleos essenciais sobre o ciclo celular foi avaliado através de marcação com iodeto de propídio e quantificação das fases de ciclo celular por citometria de fluxo. A quantificação de células em SubG1 foi utilizada como parâmetro para avaliação de apoptose, que foi confirmada através da marcação de TUNEL. A produção de TGF-1 foi avaliada por ELISA. Resultados: Os dois óleos essenciais reduziram a viabilidade da linhagem celular A549 (IC50: OG:160g/mL / MV:117g/mL), os tratamentos também induziram parada do ciclo celular em S com 24h de tratamento (controle: 12,31±0,89 / OEOG: 15,70±1,15 / OEMV: 23,35±0,75) efeito já registrado para eugenol. Também houve aumento do percentual de células em SubG1 (controle: 15,05±0,71 / OEOG: 91,94±1,71 / OEMV:24,62±1,06), indicando aumento da fragmentação de DNA, um dos sinais de apoptose, que foi confirmado pelo aumento da mediana de fluorescência na marcação de TUNEL (controle:59.1±3.4 / OEOG:68.6±3.7 / OEMV:75.3±15.7). Houve redução da produção de TGF-1 nas concentrações não letais dos óleos essenciais (10 e 50g/mL). Conclusões: Esses dados demonstram o potencial indutor de apoptose e de parada de ciclo celular, desses óleos essenciais para o tratamento de tumores, sobretudo aqueles caracterizados pela produção de TGF-1, citocina importante para a sobrevivência e proliferação de células tumorais. Contudo, essa citocina desempenha papéis importantes na homeostase do organismo, e por isso são necessários estudos que avaliem o efeito sistêmico desses óleos essenciais.
Ocimum. gratissimum L. and Mentha x villosa Huds are aromatic plants largely used, in Brazil and other countries, for therapeutic and culinary purposes. Several pharmacological properties have been described for their essential oil and their major compounds: Eugenol and piperitenone oxide respectively. However, the antiproliferative effect and the blockage of the TGF-1 production are poorly understood. This cytokine contributes for the development of late-phase tumors. This study aimed to evaluate the effects of the essential oils of Ocimum gratissimum and Mentha x villosa over a TGF-1 producer human lung adenocarcinoma cell line. Methodology: Viability was assessed through MTT assay, on cell lineages (A549 and J774 A.1) and intraperitoneal macrophages treated for 48h with essential oil concentrations ranging from 5 to 200g/mL. Cell cycle and SubG1 DNA amount was evaluated through propidium iodide staining followed by flow citometry analysis. TUNEL assay was used to quantify the DNA fragmentation. ELISA was performed to measure the TGF-1 production. Results: Both essential oils reduced A549 cell viability (IC50: EOOG:160g/mL / EOMV:117g/mL), there was also cell cycle arrest at S phase, after 24hours of treatment (control: 12,31±0,89 / EOOG: 15,70±1,15 / EOMV: 23,35±0,75). SubG1 DNA amount was also elevated after treatment (control: 15,05±0,71 / EOOG: 91,94±1,71 / EOMV:24,62±1,06), an indicative of DNA fragmentation, one of the apoptosis sign. This effect was confirmed by the elevated TUNEL labeling. The non-lethal concentrations of the essential oils (10 and 50g/mL) led to the reduction of TGF-1 production. Conclusion: These data indicates the apoptotic and cell cycle arrest effects of the essential oils, mainly over TGF-1 producing tumors. As this cytokine has a key role over the survival and proliferation of these cancer cells. The possible systemic effects of these treatments are yet to be evaluated, as the TGF-1 blockage may affect the maintenance of homeostasis.
Databáze: Networked Digital Library of Theses & Dissertations
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